牛奶抗生素檢測有什麽好方法？

牛奶中抗生素殘留的幾種常用檢測方法隨著奶牛飼養業的發展，抗生素在預防和治療奶牛疾病方面得到廣泛的應用。生鮮牛奶中抗生素的來源主要是：第壹，治療泌乳期病牛時使用的抗生素會從奶牛體內移行到乳腺殘留進入牛奶中，資料表明治療後的奶牛，其擠出的牛奶5天內都有抗生素殘留；其二，為了預防奶牛疾病並提高產量，在奶牛飼料中添加抗生素也會造成牛奶中抗生素的殘留；第三，由於牧場管理不善，擠奶、儲奶沒有嚴格的衛生制度和配套的設施，人為添加或造成牛奶抗生素的汙染。牛奶中含有抗生素，不僅對人的健康造成很大的危害，而且對乳品加工企業帶來經濟損失（因無法生成酸奶和奶酪）。因此必須嚴格控制牛奶中抗生素殘留，除了要做好科學飼養、精心管理；正確擠奶和預防疾病外，還要規範抗生素的使用，按國標中有關規定，用藥後的奶牛5天後所產的牛奶才可作為原料乳，並且要檢測其殘留。世界糧農組織（FAO）、世界衛生組織（WHO）、歐盟（EC）及美國的食品和藥品管理局（FDA）等對食品中抗生素最大殘留量都有明確的規定，我國也有鮮奶中抗生素殘留量檢驗標準（GB4689.27—94）。目前，鮮奶中抗生素殘留的檢測方法大致分為三類：生物測定法（微生物測定法、放射受體測定法）、免疫法（放射免疫法、熒光免疫法、酶聯免疫法）、理化分析法（波譜法、色譜及聯用技術）。下面介紹幾種常用的牛奶中抗生素殘留檢測方法。 TTC法 TTC法是我國鮮奶中抗生素殘留量檢驗標準（GB4689.27—94）的檢測法，屬生物檢測法。其測定原理基於抗生素對微生物的抑制作用。如果牛奶中含有抗生素，則加入菌種（嗜熱鏈球菌）經培育2.5~3小時後,加入TTC指示劑(三苯基四氮唑)不發生還原反應,所以樣品呈無色狀態;如果牛奶中不含抗生素,則樣品呈紅色.這樣實驗後樣品顏色不變的為陽性,樣品染成紅色的為陰性。 TTC法的具體操作步驟: 1.菌液制備:將單菌種(嗜熱鏈球菌)以脫脂乳為培養基,在36±1℃培養箱中培養15小時後,再以脫脂乳以至於1:1稀釋待用; 2.取待檢樣液9mL,在80℃水浴加熱5分鐘後冷卻到37℃以下,加活菌液1mL,在36℃±1℃水浴2小時,加入4%的TTC指示劑0.3mL, 36℃±1℃水浴培養30分鐘; 3.若樣液顏色不變為陽性,呈紅色為陰性;若陽性的樣液,再置於水浴中培養30分鐘,不顯色的為陽性,呈紅色為陰性. TTC法測定各種抗生素的靈敏度為:青黴素:4ppb,鏈黴素:500ppb,慶大黴素:400ppb,卡那黴素:5000ppb.它具有費用低,易開展的優點;缺點是耗時長，要求操作人員需有壹定專業知識且實驗過程中菌液的制備、水浴過程控制都要求嚴格遵守操作規程，否則易出現假陽性，以致出現檢驗結果的不穩定性。 Delvotest? sp法（戴爾沃檢測法）該法最早在香港傳到廣東的，其使用是基於20世紀80年代初香港要求廣東出口的生奶必須“無抗”且要求采用Delvotest法檢測。該方法也是生物測定法，其試劑是由荷蘭DSM公司生產並由AOAC認證。原理是利用微生物—嗜熱芽胞菌在64℃條件下培養2.5～3小時後會產酸,酸引起指示劑BCP(溴甲酚紫)變為黃色;若牛奶樣品中不含抗生素,培養後樣品呈黃色,如樣品中含有抗生素, 嗜熱芽胞菌生長受到抑制而無法產酸,指示劑將不變色. Delvotest? sp 法的操作步驟: 1.以無菌操作將壹片營養藥片夾放入小試管內; 2.用微量移液管將0.1mL牛奶樣品註入小試管內; 3.把小試管放入已預熱至64℃的水浴箱或恒溫器中培養; 4).定時3小時取出觀察顏色變化.如果底部2/3的固體介質是黃色,則為陰性, 如果底部2/3的固體介質是紫色,則為陽性. Delvotest? sp 法具有廣譜性,可檢測到?-內酰胺類抗生素在內的更多抗生素,如磺胺類、四環素類、大環內酯類、氨基糖苷類、氯黴素等，其中對青黴素和磺胺類抗生素特別靈敏. 其靈敏度為：青黴素:3ppb,鏈黴素:300ppb,慶大黴素:400ppb,卡那黴素:2500ppb。Delvotest? sp 法集操作方便，嚴格實用，容易判斷，結果可靠，費用適中等優點；但也易出現假陽性，實驗證明：當牛奶樣品中添加微生物防腐劑（如乳酸鏈球菌素—Nisn）或樣品中有足夠的洗滌劑殘留時，便可影響嗜熱芽胞菌生長而使實驗為陽性。 Snap?法該方法是酶聯免疫法，由美國IDEXX公司生產其檢測分析儀及其試劑盒，均獲得AOAC認證，它利用了竟爭酶聯免疫技術。其基本原理是用特異性抗體將固相載體激活，加入含待測抗原的溶液和壹定量的酶標記抗原在45℃±5℃***同保溫，使樣品內的抗生素與內置抗生素標誌物竟爭與固定的抗體結合，然後進行洗滌和顯色，內置抗生素標誌物與固定的抗體結合形成的復合體，通過酶的作用分解可形成有色物質，通過測定色度並與參照物對照，就可以確定結果是陽性或陰性。 Snap?法操作步驟： 1.加入乳樣於樣品管中,搖勻,加熱樣品和檢測板5分鐘; 2.加入乳樣於樣品孔中,當激活圓環開始退卻時,按Snap鍵; 3.反應4分鐘,由Snap?讀數儀讀取並打印結果.檢測讀數小於1.05時判為陰性,大於1.05時判為陽性. Snap?法是壹種將酶化學反應的敏感性和抗原抗體免疫反應的特異性相結合的方法,其敏感性和特異性好,檢測的靈敏度以普遍使用的?-內酰胺類計：青黴素:5ppb,阿莫西林:10ppb,氨芐西林:10ppb,頭孢西林:8ppb.其他抗生素如四環素等的檢測,則需購買相應的試劑來檢測. Snap?法檢測結果快速準確, 9分鐘內即可檢測出牛奶中?-內酰胺類、四環素類、磺胺類等抗生素的殘留含量，且有半定量的讀數，可監控牧場用藥的情況；檢測儀器穩定性良好，結果重現性高，整個檢測過程簡單方便；但需購置專用儀器和試劑，成本較高。高效液相色譜檢測法它是壹種理化檢測方法,是利用抗生素分子中的基團所具有的特殊反應來測定其含量.檢測的過程采用了氣相色譜理論,通過高壓液相和高靈敏度的檢測器,分離速度快、效率高和操作自動化。壹般要經過樣品的提取、脫蛋白、離心、層析柱凈化、衍生化等步驟，能檢測抗生素的具體含量，敏感性較高，但檢測程序復雜，費用較高，需購買色譜儀等檢測設備，不適合小型檢驗室。傳統的抗生素檢測方法不少,有的操作煩瑣,有的實驗條件要求高,有的檢驗時間太長;這些不僅會給乳制品生產企業造成經濟上和時間上的損失,而且檢測結果常常會被原輔材料和人為操作等因素所影響.鑒於牛奶中抗生素殘留是涉及人類健康的公***衛生問題,乳品企業及牧場應重視和加強檢測工作,應用壹些簡單、快速和準確性高的方法來監控產品的質量，保證消費者的健康。納米膠體金層析法該方法是基於競爭法膠體金免疫層析技術，將檢測液加入試紙卡上的樣品孔，檢測液中的抗生素與金標墊上的金標抗體結合形成復合物，若抗生素在檢測液中濃度低於100ng/mL，未結合的金標抗體流到T區時，被固定在膜上的抗生素BSA偶聯物結合，逐漸凝集成壹條可見的T線；若抗生素濃度高於100ng/mL，金標抗體全部形成復合物，不會再與T線處抗生素BSA偶聯物結合形成可見T線。未固定的復合物流過T區被C區的二抗捕獲並形成可見的C線。C線出現則表明免疫層析發生，即試紙有效. /chinese/content.asp?ModuleType=3&ChannelID=3&id=174 膠體金法操作步驟： 1．將采集的牛奶樣品進行編號，置於常溫（20-30℃）室內。（低溫牛奶流動性差，不適合進行試紙層析測試） 2．搖勻牛奶，用吸管取1mL加入到離心管中，7000rpm離心3-4分鐘至分離出脂肪層。脂肪層下5mm處液體（脫脂牛奶）即為待測液。 3．取出試紙條，用吸管吸取3滴待測液滴於加樣孔中， 4．5分鐘後判斷結果，10分鐘後的結果無效。 /chinese/content.asp?ModuleType=3&ChannelID=3&id=156 結果解釋陰性：C線顯色，T線肉眼可見，無論顏色深淺均判為陰性。陽性：C線顯色，T線不顯色，判為陽性。無效：C線不顯色，無論T線是否顯色，該試紙均判為無效。保存和穩定性 4-30℃陰涼幹燥處保存，不可冷凍，避免陽光直曬，生產日期起18個月內有效。納米膠體金層析法適用於樣品的初篩，檢測時間短，出結果速度快，且能在常溫下保存18個月之久，操作簡單，無需任何專業的技術，沒有檢測環境的需求不管是奶農還是奶站工作人員還是專業的檢測人員，都可以方便使用。