概述
確保藥品安全、有效、質量可控是藥品研究、開發、評價應遵循的基本原則，其中藥品質量控制是確保藥品安全、有效的基礎和前提。為了達到質量控制的目的，就必須從多角度、多層次來控制藥品的質量，也就是說，要對藥品進行多種檢測，全面考察藥品的質量。壹般來說，每個檢驗項目可以選擇不同的分析方法。為了使檢驗結果準確可靠，就必須對所采用的分析方法的科學性、準確性和可行性進行驗證，以充分說明分析方法符合檢驗項目的要求，這就是通常所說的方法驗證。方法驗證的目的是確定所采用的分析方法是否科學合理，是否能有效控制藥品的內在質量。
從本質上講，方法驗證就是根據試驗大綱的要求，事先設定壹定的驗證內容，通過設計合理的試驗來驗證所使用的分析方法能否滿足試驗大綱的要求。
方法驗證在分析方法的建立過程中起著重要作用，已成為質量研究和質量控制不可或缺的壹部分。
只有經過驗證的分析方法才能用來控制藥品質量，因此方法驗證是制定質量標準的基礎。方法驗證是藥物研究過程的重要組成部分。
二、方法驗證的壹般原則
原則上，每次試驗所用的分析方法，都需要進行方法驗證。
方法驗證的內容應根據檢驗項目的要求，結合所用分析方法的特點來確定。
同壹分析方法用於不同的測試項目，會有不同的驗證要求。例如，采用高效液相色譜法進行制劑鑒別和雜質定量試驗時應進行不同要求的方法驗證，前者重點要求驗證特異性，而後者重點要求驗證特異性、準確性和定量限。
三、方法驗證主要涉及三個方面
（壹）需要驗證的檢驗項目
鑒別、
雜質檢查
定量測定（含量測定、溶解度、釋放度等
其他特異性試驗（分子量和分子量分布、生物活性等）
鑒別
鑒別的目的是確定被分析物是目標化合物，而不是其他物質，鑒別所用的分析方法要求有很強的特異性。
雜質檢查主要用於控制主要成分以外的雜質，如有機雜質、無機雜質等。雜質檢查可分為限量試驗和定量試驗兩種情況。限值試驗的分析方法驗證側重於特異性和檢出限。
定量檢測的分析方法驗證強調特異性、準確性和定量限。
定量測定包括含量測定、制劑溶出度測定等，由於這類項目對準確度要求較高，所以所用的分析方法要求有壹定的特異性、準確性和線性。
其他特定的檢測項目還包括粒度分布、旋光、分子量分布、生物活性等，由於這些檢測項目的要求與鑒別、雜質檢查、定量測定等項目不同，對這些項目的分析方法的驗證也應有不同的要求。
（二）分析方法
分析方法是為完成上述檢驗項目而建立的檢驗方法。
分析方法的原理
儀器及儀器參數
試劑
系統適用性試驗
供試品溶液的配制
對照品溶液的配制
測定
試驗結果的計算與報告
試驗方法
化學分析方法
化學分析方法。
儀器法
這些方法各有特點，不同的檢測項目可以使用同壹種檢測方法，但驗證內容不壹定相同
（三）驗證內容
驗證內容：
方法特異性
線性
範圍
準確度
精密度
檢測限
定量限
耐久性
系統適用性
四、方法驗證的具體內容
（壹）特異性
特異性是指所使用的分析方法在存在其他成分（如雜質、降解物、輔助材料等。)可能正確識別被分析物質的情況下，檢測的特異性。被分析物質的特性。
通常，鑒別、雜質檢查、含量測定方法都應檢查其特異性。如果所用方法的專屬性不夠，應采用多種方法進行補充。
1、鑒別反應
鑒別檢驗應確認被分析物符合其特征。
獨家性試驗要證明其能與可能存在的物質或結構相似的化合物相區分****，要確認含被分析物的試品呈陽性反應，而不含被測組分的陰性對照呈陰性反應，組分中結構相似或相關的化合物也應呈陰性反應。
2、雜質檢查
作為純度檢查，分析方法應確保能檢測出被分析物中雜質的含量，如物質、重金屬、有機溶劑等。因此，雜質檢查要求分析方法具有壹定的特異性。
在可以得到雜質的情況下，可以在被測物中加入壹定量的雜質，證明雜質與 **** 中存在的物質可以分離檢測，並具有相應的準確度和精密度。
在無法獲得雜質或降解產物的情況下，可將結果與另壹種已證明合理的方法進行比較，以確定特異性，但這種方法的分離或檢測原理不同，或具有更大的鑒別力。或將試料經強光、高溫、高濕、酸、堿水解、氧化等破壞（配制時應考慮輔料的影響），比較破壞前後檢出雜質的數量和含量。必要時采用二極管陣列檢測和質譜檢測，進行色譜峰純度檢查。
3、含量測定
含量測定的目的是獲得被測物中分析物含量或效價的準確結果。在可以得到雜質含量的情況下，對於主成分含量的測定可以在受試品中加入雜質或輔料，考察測定結果是否受到幹擾，並與未加入雜質和輔料的受試品的測定結果進行比較。
在無法獲得雜質或降解產物的情況下，可采用另壹種經過驗證或藥典認可的方法，比較兩種方法的測定結果。
也可以通過破壞性試驗（強光、高溫、高濕、酸、堿水解和氧化）獲得含有雜質或降解產物的樣品，然後測定兩種方法的含量，並比較結果。
必要時可進行色譜峰純度檢查，以證明測定色譜峰的組分含量中不含其他組分。
（二）線性度
線性度是指在設計的測定範圍內，檢測結果與被測物中分析物濃度（量）直接呈線性關系的程度。線性度是定量測定的基礎，涉及定量測定的項目，如雜質定量試驗和含量測定都需要驗證線性度。線性度的測定應在設計的測量範圍內進行。可采用精密稀釋貯液器，或分別精密稱取樣品，制備壹系列被測物質濃度系列進行測定，至少制備五個濃度系列。將測得的響應信號繪制成待測物質濃度的函數圖，觀察是否呈線性，並用最小二乘法進行線性回歸。必要時，可對響應信號進行數學換算，再進行線性回歸計算，並說明依據。
（三）量程
量程是指能達到壹定準確度、精密度和線性度的能力，該測試方法適用於試樣中分析物濃度的高低限或量的區間。範圍是確定的值，應在測試研究開始前確定驗證的範圍和測試方法。
符合要求的原料藥可用於配制不同濃度的藥物，並根據相應的檢測方法進行測試。範圍通常用與分析方法測試結果相同的單位表示（如濃度百分比）。涉及定量測定的試驗需要驗證量程，如含量測定、含量均勻性、溶出或釋放、雜質定量試驗等。
應根據劑型和/或檢測方法的要求確定量程。
1、含量測定 範圍應為試驗濃度的 80%～100%或更寬。
2、制劑含量的均勻性 範圍應為試驗濃度的 70%～130%。根據劑型特點，如氣霧劑、噴霧劑，必要時可適當放寬範圍。
3、溶出度或釋放度 對於溶出度，其範圍應為限度的±20%；若為限度範圍，則應為下限的-20%至上限的+20%。對於釋放度，如果規定了限度範圍，從 1 小時後的 20%到 24 小時後的 90%，則驗證範圍應為 0 至 110%。
4、雜質雜質的測定，其範圍應根據實際測定的初步結果，制定±20%的限量。若含量測定與雜質檢查同時進行，用面積歸壹化法時，線性範圍應為規定雜質限量的-20%至含量限量（或上限）的+20%。
（四）準確度
準確度是指方法測定的結果與真實值或公認參考值之間的接近程度。有時也稱為真實度。壹定的準確度為定量測定的必要條件，因此，定量測定的檢驗項目均需驗證準確度，如含量測定、雜質定量檢驗等。準確度應確定在規定的範圍內，對於制劑來說，壹般要通過回收試驗來驗證。試驗設計時需考慮在規定範圍內，制備三種不同濃度的試樣，各測三次，即測九次，報告已知添加量的回收率（%）或測定結果的平均值、真實值與其置信區間的差值。
1、含量測定
原料測定可用已知純度的對照品或符合測定要求的原料，或將本方法所得結果與已建立的另壹測定方法的結果進行比較，以確定結果的準確性。制劑可通過含有已知量被測物質的組分混合物進行測定。如果不能得到制劑的全部組分，可在制劑中加入已知量的被測物質進行測定，必要時可與另壹種已建立準確度的方法的測定結果進行比較。
2、雜質定量試驗
雜質的定量可在原料藥或制劑中加入已知量的雜質進行測定。如果無法得到雜質，可將此方法的結果與另壹種成熟的方法，如藥典方法或有效方法進行比較。如果無法測定雜質的相對響應因子，可在線測定雜質的相關數據，如用二極管陣列檢測器測定紫外光譜，當雜質的光譜與主成分的光譜相似時，可近似計算原料藥的響應因子，從而計算出雜質的含量（自控法）。並應註明單個雜質的重量比（%）或面積比（%）以及相當於主成分的雜質總量。
（五）精密度
精密度是指在規定的試驗條件下，對同壹均質的試驗品，抽樣若幹次所得到的壹系列試驗結果的接近程度（分散程度）。
精度壹般用偏差、標準偏差或相對標準偏差表示。樣本至少應采集六次。
精度可從三個層面來考察：
重復性
中間精度
再現性
1.重復性
重復性是指同壹分析人員在相同的操作條件下，以較短的時間間隔獲得的結果的精確度。可在規定範圍內測定重復性，至少用 9 次結果進行評定，如制備 3 種不同濃度的試樣，每種測定 3 次，或 100%濃度水平，至少用 6 次結果進行評定。
2、中間精密度
中間精密度是指同壹實驗室，由於實驗室內部條件的變化，如時間、分析人員、儀器設備的變化，測定結果的精密度。驗證方案設計中的變化因素壹般有日期、分析人員、儀器設備。
3、重現性
指不同分析人員在不同實驗室之間測定結果的精密度。當分析方法將被法定標準采用時，應進行重現性試驗。
（六）檢出限
檢出限是指樣品中被分析物所能檢出的最小量，但不壹定能準確定量。驗證指標的意義在於考察方法是否具有靈敏的檢測能力。因此，在進行雜質限量檢測時，需要證明該方法具有足夠低的檢測限，以確保雜質的檢測得到控制。
VI.方法驗證的評價
（壹）與方法驗證評價有關的壹般考慮因素
壹般來說，方法驗證應圍繞驗證目的和壹般原則進行，方法驗證的內容選擇和實驗設計應系統合理，驗證過程應規範嚴謹。並不是每個檢驗項目的所有分析方法都需要進行全部內容的驗證，但同時也應註意驗證內容應足以證明所采用的分析方法是合理的。如雜質限量試驗壹般需要驗證特異性和檢出限，而對於精密度、線性、定量限等涉及定量測定的項目，壹般不需要驗證。
（二）核查方法的整體性和系統性
核查方法的內容相互關聯，是壹個整體。因此，無論是從研發角度還是評價角度，方法驗證都註重整體性和系統性。例如，對於鑒定項目所要求的特異性，壹般壹種分析方法不可能完全鑒定出被分析物，此時采用兩種或兩種以上的分析方法可以加強鑒定項目的整體特異性。在方法驗證內容物之間存在較多相關性時，可進行互補。如原料藥含量測定采用容量分析法，由於方法本身的專屬性稍差，但如果雜質檢測采用專屬性較強的色譜法，壹般認為整個檢測方法也具有較強的專屬性。
總之，由於實際情況的復雜性，在方法驗證過程中，不提倡教條式的方法驗證。
此外，越來越多的新方法被用於質量控制，如何對這些方法進行驗證，需要具體情況具體分析，不能照搬指南。
此外，質量控制中正在使用越來越多的新方法。