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紫外吸收法測定蛋白質含量的原理

蛋白質吸收紫外線的原理:組成蛋白質的氨基酸在可見光下沒有光吸收,只有色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸在紫外光下有吸收能力。

測定蛋白質含量的方法有:堿性染料法、縮二脲法、紫外分光光度法和考馬斯亮藍法。

1,基本染色方法

該方法是在堿性溶液中用偶氮染料將帶有苯環的氨基酸顯色,然後測定溶液中的吸光度,再與標準曲線比較,從而確定蛋白質的含量。

2.縮二脲法

雙縮脲法是測定蛋白質的經典方法。在堿性條件下,蛋白質分子中的肽鍵與銅離子反應生成紫色縮二脲配合物。通過測量溶液在650納米處的吸光度,可以確定蛋白質的含量。

3.紫外分光光度法

在紫外分光光度法中,蛋白質中的肽鍵在280nm處有強吸收。通過測量溶液在280納米處的吸光度,可以確定蛋白質的含量。該方法具有靈敏度高、準確度高的優點,可用於微量蛋白質的測定。

4.考馬斯亮藍法

考馬斯亮藍法是壹種基於染料結合法的蛋白質測定方法。該方法利用考馬斯亮藍G-250與蛋白質結合的能力。在堿性條件下,考馬斯亮藍G-250與蛋白質結合形成復合物,最大吸收波長為595nm。通過測量溶液在595nm處的吸光度,可以確定蛋白質的含量。

5.熒光光譜法

熒光光譜法是壹種用熒光染料測定蛋白質含量的方法。在壹定條件下,壹些熒光染料(如Bis-ANS)可以與蛋白質結合,發出熒光。通過將測得的熒光強度與已知的標準曲線進行比較,可以確定蛋白質的含量。

蛋白質的結構和功能

1,蛋白質的結構

蛋白質是生命的物質基礎,是有機大分子,是構成細胞的基本有機物質,是生命活動的主要承擔者。沒有蛋白質就沒有生命。氨基酸是蛋白質的基本組成部分。它是壹種與生命和各種形式的生命活動密切相關的物質。

2.蛋白質的功能

蛋白質可以通過分解、合成、轉化等代謝過程,幫助人體維持代謝平衡,維持健康狀態。蛋白質可以維持人體內的水分平衡,同時有助於維持血壓、膠體滲透壓等重要生理功能。

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