I．標準曲線
壹般情況下，用分光光度法測定某種物質的含量，首先要制作標準曲線，然後根據標準曲線求出被測物的含量。因此，制作標準曲線是生物分析的壹項基本技術。
二、蛋白質含量的測定
1、凱氏定氮法
2、生物脲法
3、福林酚試劑法
4、紫外吸收法
5、考馬斯亮藍法
三、考馬斯亮藍法測定蛋白質含量--標準曲線的制作 曲線的制作
（壹）、試劑：
1、考馬斯亮藍試劑：
考馬斯亮藍 G-250 100 mg 溶於 50 ml 95%乙醇中，加 100 ml 85%H3PO4，用蒸餾水稀釋至 1000 ml，濾紙過濾。
2、標準蛋白質溶液：
純牛血清血蛋白，預微凱氏定氮法測定蛋白氮含量，按純度相同配制成 0.15 mol/L NaCl。/LNaCl配制成100ug/ml的蛋白質溶液。
（二）、儀器：
1、722S型分光光度計的使用方法和原理（ ）。
2、移液管的使用方法（）。
（三）、標準曲線的繪制：
管號 0 1 2 3 4 5 6
100ug/ml標準蛋白（ml） 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
0.15mol/L NaCl（毫升） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4
微克、20 微克、30 微克、40 微克、50 微克、60 微克），在坐標軸上繪制標準曲線。
1）利用標準曲線求出回歸方程。
2), 用公式計算回歸方程。
3), 或用原點作圖，測得回歸直線方程。即 A595nm=a×X( )+6
壹般相關系數應在 0.999 以上，至少 2 9 以上。
④、將近兩個作點繪制在壹條直線上，直線上的點應在直線的兩側。
（四）、蛋白質含量的測定：
被測樣品即蛋白質含量樣品（含量應在被測範圍內處理），按照操作步驟1操作，測得樣品的A595nm，然後利用標準曲線或回歸方程求出樣品的蛋白質含量。
壹般情況下，所測樣品的A595nm值在0.1-0.05之間，如果上述樣品的A595nm值過大，可以稀釋後再測A595nm值，然後進行計算。
（五）註意事項：
1.玻璃儀器應洗凈。
2、用量要準確。
3、玻璃儀器要幹燥，避免溫度變化。
4、對照：用被測物質以外的物質作空白對照。
藥品制備（磷酸鹽緩沖液的制備）
壹．藥品的制備步驟
（壹）實驗準備：
1．準備好所需藥品和玻璃儀器。
2、洗滌。(怎樣洗才算幹凈？）
（二）計算：
1．百分濃度計算：
1）、G/V 比
例如：配制 1%的 NaCl，稱取 1g NaCl 溶於 100ml 水中。
2）、V/V 比：
例如，配制 75% 的乙醇 100 毫升，75%×100%=100%×X，X=75 毫升。取 75 毫升無水乙醇，加入 25 毫升蒸餾水。
乙醇：乙醚：丙酮=2：1：2 用 500 毫升，各取 200 毫升，100 毫升，200 毫升混合。
3）G/V 比：用得較少，如計算某些元素如 Fe 的灰分含量。
2、摩爾濃度計算：註：藥物的分子量壹般在標簽上註明。
1）、0.1M 或 0.1mol/L NaCl 加 100ml。
M=質量/體積（L） 稱取 NaCl0.1×0.1×40=0.4g 摩爾=G（g）/摩爾質量
2）、0.1mMNaCl 加 100ml
m=毫摩爾/體積（L） 稱取 NaCl0.1×0.1×40=0.4g
毫摩爾數=G(mg)/摩爾質量
3）、0.1uNaCl 100ml
mM=微摩爾數/體積（L）稱取 NaCl0.1×0.1×40=0.4mg
微摩爾數=G（ug）/摩爾質量 稱取 NaCl0.1×0.1×40=0.4ug
3、混合溶液的配制計算：
如配制 3uMEDTA、2.25mM NBT 以及 60uM 溶液 100ml，用 50mM 磷酸鹽緩沖液配制。
註：1、分別計算校準體積
2、分別配制後再混合，但總體積不能是100ml
（三）、標度：
1、根據需要選擇不同量程的天平按不同精度的要求去測量儀器，如量筒或移液管。
2、使用電子分析天平。
（四）溶解：
1、溶劑的選擇。根據藥物配置要求選擇溶劑。蒸餾水、雙蒸餾水、非離子水等。
2、只能在燒杯中溶解。註意溶劑只能加到總體積的2/3左右，剩余溶劑洗燒杯三次左右，直至洗凈。
小知識：藥品標簽上壹般標有藥品的溶解性質和分子式，根據分子式和常識判斷藥品的結構和性質特點（包括溶解性質）。
例如制備酸堿兩性物質（AA、蛋白質、核苷酸等）如果溶解性不好可以用稀酸或稀堿促溶，但pH值應在要求範圍內。
3、加熱促溶，但要註意應在制劑範圍內，有些藥物還需水溶性加熱效果更好。如：用0.1%澱粉，富水加熱（溫度在80-90℃），過多會糊化。
（五）、體積：
1、用容量瓶定容；
2、用玻璃棒引流或用小漏鬥；
3、用溶劑加到接近刻度時，再用滴管加到刻度上。要求刻度與凹液面相切為止（肉眼可見）；
4、上下窯容量瓶數次，攪拌均勻即可。(註意不再固定容量，防止溶液泄漏。）
（六）、裝入試劑瓶，貼上標簽。
標簽上應註明：藥物濃度、名稱、配制人、配制日期等。
（七）、清理實驗場所。
II.磷酸鹽緩沖液的制備。
(i) 配制 0.2 mol/L 即 0.2M pH=6.8 的磷酸鹽緩沖液。使用磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉作為緩沖液。
選用藥物：Na2HPO412H2O（堿）和 NaH2PO412H2O（酸）加緩沖液 100 毫升，書中有說明。
（二）、計算 ：
1、註意：配置量在書上註明。
2、計算：Na2HPO412H2O重71.64×0.1=7.164g
NaH2PO412H2O重31.21×0.1=3.121g
3、含結晶水的換算不同。
書中用1/15 mol/L的緩沖液配1L，書中用Na2HPO42H2O需11.87g/L而用Na2HPO412H2O需多少g？
11.87=（178/358）×X，X=23.87g.
（c）、分別配制緩沖溶液各100ml（按要求確定配制量）。
即0.2M Na2HPO42H2O和NaH2PO42H2O各100ml.
（d）、按書上的配制量取適量再混合．
（五）、用pH試紙ceni稱緩沖液的pH值，檢驗配置是否準確。
（六）如果配制 50mM pH=6.8 的緩沖液 100 毫升，用配制的母液稀釋。
計算：50×0.1=0.2×1000×X（L）；X=0.025L；
取25ml0.2M pH=7.2的緩沖液，用蒸餾水稀釋到100ml即可。