(2)作為載體必須具備的條件:要有限制酶裂解位點;②要有標記基因(如抗性基因),以利於篩選後重組子的重組;③能在宿主細胞中穩定存在和復制;④是安全的,對受體細胞無害,且易與供體細胞分離。故選:ABC:ABC.
(3)獲取目的基因需要限制酶,限制酶能識別雙鏈DNA分子中特定的脫氧核苷酸序列,並能切斷兩脫氧核苷酸之間特定部分的磷酸二酯鍵。基因表達載體的構建在試管 I 中進行,還需要 DNA 連接酶將目的基因與質粒連接起來,形成重組質粒。
(4)PUC118質粒帶有氨芐西林抗性基因(標記基因),受體大腸桿菌應不含氨芐西林抗性基因,以便在含氨芐西林的培養基中篩選引入重組質粒的受體大腸桿菌。
(5)如題(4)所示,還應在培養基中加入氨芐西林,以篩選引入重組質粒的受體大腸桿菌。
(6)若不插入外源基因,lacZ基因可表達β-半乳糖苷酶。當培養基中含有物質A時,物質A會被β-半乳糖苷酶水解成藍色,大腸桿菌會形成藍色菌落;若外源基因中插入了lacZ基因,則帶有pUC118質粒的大腸桿菌不能表達β-半乳糖苷酶,培養基中的物質A不會被水解成藍色,大腸桿菌會形成白色菌落。如果長出藍色菌落,說明自連接載體 PUC118 質粒已轉入受體菌,但目的基因未接入載體或說明重組質粒未導入受體大腸桿菌;如果長出白色菌落,說明重組質粒已導入受體大腸桿菌。
所以答案是:(1)異養?選擇
(2)A、B、C?(2分)
(3)限制性內切酶 識別雙鏈DNA分子中特定的脫氧核苷酸序列,並與之連接。DNA 連接酶
(4)有利於篩選導入重組質粒的受體大腸桿菌
(5)氨芐青黴素
(6)①若長出藍色菌落、說明載體 pUC118 質粒已轉入受體菌,但目的基因尚未進入載體(或說明重組質粒尚未導入受體大腸桿菌)
(7)
(2)如果長出白色菌落,說明重組質粒已導入受體大腸桿菌