打開排氣閥，讓水燒開，去除鍋裏的冷空氣。冷空氣完全排出後，關閉排氣閥。
2、保溫保壓
當鍋內壓力升至1Kg/cm2時，控制熱源，維持壓力至15分鐘。
3、出鍋
切斷電源，讓滅菌器內的溫度自然下降。當壓力降至0時，打開排氣閥，擰下螺栓，打開蓋子，取出已滅菌物品。否則鍋內壓力高，打開氣閥造成的壓力差可能會使容器內的培養基飛濺，造成棉塞汙染培養基，甚至使容器爆炸。
4、加工
滅菌後的實驗儀器通常放入60℃~80℃的烘箱中烘幹，以去除滅菌過程中的水分，避免汙染。
註意事項:
1.擺放物品的要求是整齊穩定。並且需要留有空隙。
2.加蓋時，將蓋上的排氣軟管插入內滅菌桶的排氣槽內，對稱同時擰緊兩個相對的螺栓，使螺栓松緊壹致，避免漏氣。
3.滅菌結束打開滅菌鍋蓋時，註意不要把臉湊近，否則蒸汽會對臉造成傷害。