1.與硫酸的顯色反應
許多甾體激素能與硫酸、鹽酸、高氯酸等強酸反應而顯色，其中以與硫酸（或硫酸乙醇）
的顯色反應應用較廣。壹些甾體激素與硫酸的顯色反應和熒光現象及用水稀釋後的變化
列舉如下。
表 11-1 類固醇激素與硫酸的顏色反應和熒光現象
藥名 加水稀釋後的顏色熒光現象
地塞米松 淡紅褐色 無 顏色消失
醋酸可的松 黃色或橙色 無 顏色消失、溶液澄清
醋酸潑尼松 橘黃色 無 黃色 藍綠色漸變 氫可酮 棕色至紅色 綠色 黃色至透明黃色
乙炔雌二醇 橘紅色 黃綠色 紅色沈澱
乙炔雌二醇 橘紅色 黃綠色 玫瑰紅絮狀沈澱
甲基睪酮 淡黃色 綠色 暗黃綠色熒光
地塞米松磷酸鈉 黃色或紅棕色 無 黃色絮狀沈澱
類固醇激素與硫酸的著色反應是藥物結構中存在顏色的結果。著色反應是藥物結構中甾體母核的反應。具有操作簡便，生成
的顏色或熒光不同而能相互區別，反應較靈敏等特點，雖然操作時對取樣量和試劑用量要求
嚴格，專屬性較差，但仍為各國藥典所采用。
2.官能團顯色反應
4D-3-酮基或C-酮基可異構
（1）酮基 除雌激素類固醇激素含有酮基外，煙酸酰肼、硫酸苯肼、2,4二硝基苯肼等羰基試劑顯色，形成黃色腙。煙酸肼、硫酸苯肼和 2,4-二硝基苯肼等羰基試劑會顯色，形成黃色腙，以便識別。例如醋酸可的松用此法鑒別：取本品約0.1mg，加乙醇1ml溶解，加入新配制的硫酸苯肼試液8ml，於70℃加熱15min，即顯黃色。
該反應，在鹽酸的酸性條件下，與D-3-酮基結構可立即反應，與D-3-酮基需1-3min，
與C-酮基需1-3min、
與C
（2）C-a-醇酮基 皮質類固醇藥物分子結構中C位的a-醇酮基具有還原性，可
與氧化劑四唑鹽等試液反應而顯色。如鑒別醋酸潑尼松：取本品1mg，加乙醇
2ml使溶解，加10%氫氧化鈉溶液2滴與氯化四氮唑1ml，即顯紅色。
該顯色反應也是某些激素類藥物的特殊雜質 "其他類固醇 "檢查和皮質類固醇含量測定的依據
。
（3）甲基酮或活性亞甲基可與亞硝基亞鐵氰化鈉反應，使芳香族醛類顯色。與亞鐵氰化鈉反應
亞硝酸鈉被認為是鑒別黃體酮的靈敏而唯壹的方法。取本品約 5mg 置小試管中，加甲醇 0.2ml
溶解，加亞硝基鐵氰化鈉細粉約 3mg，碳酸鈉和乙酸銨約 50mg，搖勻，放置 10～30min
應顯藍紫色。
（4）酚羥基 雌激素 C 對酚羥基、C 對氫比較活潑，與重氮苯磺酸反應生成紅色偶氮染料。 (5）有機氟 壹些含氟的甾體激素類藥物，在氧氣瓶中燃燒生成無機氟化物，在12%醋酸鈉中燃燒生成無機氟化物
醋酸鈉在稀醋酸中與茜素氟藍和硝酸鈰反應生成藍紫色。