壹、原理可見光、紫外線照射某些物質，主要是由於物質分子中價電子能級躍遷對輻射的吸收，而產生化合物的可見紫外吸收光譜。基於物質對光的選擇性吸收的特性而建立分光光度法或稱吸收光譜法的分析方法。它是以朗伯──比耳定律為基礎。1朗伯—比耳定律A=lg—-=ECLT式中A為吸收度；T為透光率；E為吸收系數，采用的表示方法是（E1％1cm），其物理意義為當溶液濃度為1%（g/ml），液層厚度為1cm時的吸收度數值；C為100ml溶液中所含被測物質的重量（按幹燥品或無水物計算），g；L為液層厚度，cm。二、使用範圍凡具有芳香環或***軛雙鍵結構的有機化合物，根據在特定吸收波長處所測得的吸收度，可用於藥品的鑒別、純度檢查及含量測定。三、儀器可見-紫外分光光度計。其應用波長範圍為200～400nm的紫外光區、400～850nm的可見光區。主要由輻射源（光源）、色散系統、檢測系統、吸收池、數據處理機、自動記錄器及顯示器等部件組成。本儀器是根據相對測量的原理工作的，即先選定某壹溶劑（或空氣、試樣）作為標準（空白或稱參比）溶液，並認為它的透光率為100％（或吸收度為0），而被測的試樣透光率（或吸收度）是相對於標準溶液而言，實際上就是由出射狹縫射出的單色光，分別通過被測試樣和標準溶液，這兩個光能量之比值，就是在壹定波長下對於被測試樣的透光率（或吸收度）。本儀器可精密測定具有芳香環或***軛雙鍵結構的有機化合物、有色物質或在適當條件下能與某些試劑作用生成有色物的物質。使用前應校正測定波長並按儀器說明書進行操作。四、儀器的校正1.波長的準確度試驗以儀器顯示的波長數值與單色光的實際波長值之間誤差表示，應在±1.0nm範圍內。可用儀器中氘燈的486.02nm與656.10nm譜線進行校正。2.吸收度的準確度試驗3.雜散光的試驗4.波長重現性試驗5.分辨率試驗五、測定方法1.對照品比較法（1）按各品種項下的方法，分別配制供試品溶液和對照品溶液，對照品溶液中所含被測成分的量應為供試品溶液中被測成分標示量的100±10%，所用溶劑也應完全壹致，在規定的波長測定供試品溶液和對照品溶液的吸收度後，按下式計算含量，即得。（2）計算式A樣×G對/稀釋倍數×100×1含量（%）=————————————--×100%A對×G樣/稀釋倍數×100×12.吸收系數法（1）按各品種項下的方法配制供試品溶液，在規定的波長處測定其吸收度，再以該品種在規定條件下的吸收系數計算含量。用本法測定時，應註意儀器的校正和檢定。（2）計算式A樣含量（%）=——————————————-×100%G樣/稀釋倍數×(E1％1cm)對×100×13.計算分光光度法采用計算分光光度法應慎重。本法有多種，使用時均應按各品種項下規定的方法進行。當吸收度處在吸收曲線的陡然上升或下降的部位測定時，波長的微小變化可能對測定結果造成顯著影響，故對照品和供試品測試條件應盡可能壹致。若測定時不用對照品，如維生素A測定法，則應在測定時對儀器作仔細的校正和檢定。六、註意事項1.空白溶液與供試品溶液必須澄清，不得有渾濁。如有渾濁，應預先過濾，並棄去初濾液。2.測定時，除另有規定外，應以配制供試品溶液的同瓶溶劑為空白對照，采用1cm的石英吸收池。3.在規定的吸收峰波長±2nm以內測試幾個點的吸收度，以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確，除另有規定外，吸收峰波長應在該品種項下規定的波長±2nm以內；否則應考慮該試樣的真偽、純度以及儀器波長的準確度，並以吸收度最大的波長作為測定波長。4.壹般供試品溶液的吸收度讀數，以在0.3～0.7之間的誤差較小。5.吸收池應選擇配對，否則要引入測定誤差。在規定波長下兩個吸收池的透光率相差小於0.5％的吸收池作配對，在必要的情況時，須在最終測量扣除吸收池間的誤差修正值。6.由於吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測定供試品的吸收度後應減去空白讀數，再計算含量。7.儀器的接地必須良好，壹切裸露的零件對地電位不得超過24伏（測電筆的氖管不得發亮）。8.在使用過程中，如需開啟試樣室蓋時或暫時停止測試時，必須及時推入光門鈕桿（使光電管前光門關閉），保護光電管，以防止光電管受強光或長時間照射而損壞。9.在測定時或改測其它檢品時，應用待測溶液沖洗吸收池3～4次，用幹凈綢布或擦鏡紙擦凈吸收池的透光面至不留斑痕（切忌把透光面磨損）。10.取吸收池時，應拿毛玻璃兩面，切忌用手拿捏透光面，以免粘上油汙。使用完後及時用測定溶劑沖凈，再用純化水沖凈，用幹凈綢布或擦鏡紙擦幹，晾幹後，放入吸收池盒中，防塵保存。11.若吸收池內外壁沾汙，兩池差較大的處理。（1）可用綢布纏在扁竹條外或用脫脂棉纏在細玻璃棒上蘸上乙醇，輕輕摩擦，再用純化水沖凈。（2）如上述方法處理不好，必要時可用重鉻酸鉀-硫酸洗液泡洗1～2分鐘，用自來水沖凈，再用純化水沖凈。（3）不得用毛刷刷洗或硬物拭擦，以防止表面光潔度受損影響正常使用。12.請務必註意經常保持矽膠的幹燥，目的是保護光學元件和光電放大器系統不致受潮損壞而影響儀器的正常工作，如發現有的矽膠由藍色變為粉紅色，應立即更換。該儀器幹燥劑筒有兩個：壹個是裝在放大器暗盒上，另壹個裝在單色光器暗盒上。13.在更換矽膠幹燥劑時，應關閉切斷電源。14.在停止工作期間，主機試樣室內應放入袋裝或筒裝矽膠幹燥劑。用防塵罩罩住整個儀器，並在防塵罩內放數袋防潮矽膠。15.儀器在操作中，狹縫的寬度應從小逐漸開大。若狹縫過大，由於進入光電管的光能量強度過大，將會使放大器輸出信號達到飽和，以至數字顯示出溢出（即數字閃爍或示1不變）。這不是儀器有故障。16.將波長旋轉放在625nm，鋏縫關閉在0.02nm附近，選擇按鍵恢復在停止工作部位（即三個鍵均彈出）。17.搬動儀器時應搬在主體端，不要搬在試樣室和光電管盒端以及光源燈室部位，以防止儀器狹縫或光路部件受力而發生變形。並在搬動或運輸時，應將可動部分固定，如各旋鈕可用膠布貼住，狹縫位置開大些，然後固定，不要關小狹縫，以免運輸時振動使狹縫刀口受損壞。18.儀器的光柵、反射鏡絕對不能擦拭，否則將損壞儀器光學表面，增加雜散光。19.儀器經過搬動請及時檢查並糾正波長精度，為保證測定的準確性請經常校準波長精度。如有異常，應立即報告質量保證部，但不得擅自調整，並及時做好記錄。七、結果計算AE1％1cm（供試品）=——CLE1％1cm（供試品）含量（%）=——————————-×100%E1％1cm（標準值或對照品）八、允許差儀器分析方法的誤差限度，除另有規定外，其相對偏差應在±(2.0～3.0)%。(來自百度博客)
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