壹、實驗目的
煙草是遺傳轉化的模式植物，已經建立了完善的轉化和再生體系。本實驗以煙草為實驗材料，使學生了解根癌農桿菌介導法的基本原理和壹般步驟，掌握遺傳轉化的基本操作技術。
二、實驗設備和藥物
煙葉、LBA4404質粒載體、搖床、培養皿(帶濾紙)、移液管、鑷子、手術刀和無菌水。
第三，實驗方法
根癌農桿菌介導的轉化方法已經比較成熟，易於在植物細胞和組織培養實驗室進行。具體操作步驟如下:
(1)農桿菌質粒的保存:將構建的農桿菌質粒接種於YEP固體培養基上，YEP固體培養基的組成為NaCl 0.5g NaCl，1 g酵母，1g水解酪蛋白，1.5g瓊脂，pH 7.0，冰箱冷藏。
(YEP液體培養基的配制:成分同上，除不加瓊脂外，分裝於試管中，每支試管中加入約5mL液體培養基，分裝，高壓滅菌，放入冰箱備用。
(3)搖菌:用已滅菌的牙簽或火柴棍挑出部分菌液，壹起放入YEP液體培養基中，然後在振蕩器上搖菌16-17h(180 r/min)，直至溶液變渾濁，即長出大量菌絲。
(4)用已滅菌的0.5毫米打孔機從葉片上切下葉盤，然後放入農桿菌懸浮液中5分鐘。
(5)用濾紙吸去多余的菌液，將葉片置於MS+6-BA 1.0mg/L deca IAA 0.1mg/L培養基上培養2天，再轉入添加卡那黴素100mg/L和羧芐青黴素500 mg/L的培養基中進行篩選培養。
(6)兩周後，分化卡那黴素抗性芽(應為綠色)，從基部切下，轉移到含有100mg/L卡那黴素和500 mg/L羧芐青黴素的MS+0.1 mg/LIAA上進行生根培養，生根的植株轉移到溫室中培養。
四。預期結果
愈傷組織:壹周後，淡黃色疏松的愈傷組織在脫分化培養基上生長。
芽:將愈傷組織轉移到分化培養基上兩周後，卡那黴素抗性芽分化。
生根:芽轉移到生根培養基中即可生根。
動詞 （verb的縮寫）操作要求
誘導煙草愈傷組織並再生植株。每個小組交給兩到三株再生的和生根的轉基因煙草。