1 儀器與材料
1.1 儀器HA121?50?05型超臨界萃取裝置（江蘇南通華安超臨界萃取有限公司）；島津2010型氣相色譜儀；超聲波清洗器（昆山超聲波儀器有限公司）；FZ102型植物試樣粉碎機；揮發油提取器；旋轉蒸發儀；電熱套；電子天平。
1.2 材料薄荷來自江蘇省東臺地區，7月下旬采其地上部分，陰幹切片，粉碎。經江蘇省中國科學院植物研究所郭榮麟研究員鑒定為唇形科薄荷屬植物薄荷(Mentha haplocalyx Briq.)。
薄荷醇（中國藥品生物制品檢定所）；醋酸乙酯（上海化學試劑廠）。
2 方法與結果
2.1 提取方法
2.1.1 水蒸氣蒸餾法提取稱取粉碎好的薄荷200 g，置揮發油提取器中，加水1 000 ml，按《中國藥典》2000版附錄ⅩD揮發油測定法提取揮發油。提取6 h，收集薄荷油。用無水硫酸鈉脫水，濾紙過濾。
2.1.2 冷浸法提取稱取薄荷粉末20 g，用600 ml石油醚室溫浸泡3次，每次用200 ml溶劑，浸泡時間為3 h/次，合並提取液，將濾液在旋轉蒸發儀上蒸去石油醚，以下同2.1.1項處理。
2.1.3 超聲波法提取稱取薄荷粉末20 g，以200 ml石油醚為溶劑，超聲提取3次。超聲頻率40 kHz，提取時間為30 min/次。合並提取液，將濾液在旋轉蒸發儀上蒸去石油醚，以下同2.1.1項處理。
2.1.4 超臨界CO2法提取取薄荷粉末1.3 kg，裝入萃取釜。在萃取壓力為9 MPa，萃取溫度為50℃，CO2流量為25 L/h的條件下，萃取1.5 h，收集薄荷油，以下同2.1.1項處理。
2.2 薄荷油出油率比較按上述方法分別提取薄荷油，並計算出油率。水蒸氣蒸餾法提取薄荷油的得率為1.15%，冷浸法提取薄荷油的得率為1.27%，超聲波法提取薄荷油的得率為1.34%，超臨界CO2法提取薄荷油的得率為2.43%。
2.3 薄荷醇含量測定
2.3.1 對照品溶液的制備 精密稱取薄荷醇對照品1.5 mg於1 ml容量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，搖勻，即得濃度為1.5 mg/ml的對照品溶液。
2.3.2 樣品溶液的制備 準確稱取按上述方法提取得到的薄荷油適量，置於5 ml容量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，搖勻，即得樣品溶液。
2.3.3 氣相色譜條件色譜柱為ZB?WAX彈性石英毛細管柱（30 mm×0.25 mm,0.25 μm），柱溫80℃，恒溫2 min，程序升溫5℃/min至110℃，保持1 min；程序升溫3℃/min至150℃，保持1 min；程序升溫6 ℃/min至170℃；氣化室溫度240℃；載氣為高純N2（99.99%）；檢測溫度240℃（FID）；分流比20∶1。
2.3.4 標準曲線的繪制分別精密吸取2.3.1項下對照品溶液1，2 ，3 ，4 ，5 ，6 μl註入氣相色譜儀測定，以峰面積為縱坐標，進樣量(μg)為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程y=1E+06x+73 107，r=0.999 8。結果表明在1.5 ～9.0 μg範圍內，對照品進樣量與峰面積呈良好的線性關系。
2.3.5 穩定性實驗取水蒸氣蒸餾法提取得到的薄荷油樣品溶液，分別於0，2，4，6，10，12 h進行測定，每次進樣2 μl，結果表明薄荷醇峰面積的RSD為1.26%，因此可以在12 h內進行測定。
2.3.6 精密度實驗選取水蒸氣蒸餾法提取所得薄荷油樣品，在相同的色譜條件下重復進樣6次，2 μl/次。結果表明薄荷醇色譜峰的RSD為1.02%。
2.3.7 重現性實驗取水蒸氣蒸餾法提取所得薄荷油樣品，平行取6份進行測定，結果表明薄荷醇平均含量為78.31%，RSD為1.73%，說明樣品測定具有較好的重現性。
2.3.8 回收率實驗精密稱取已知薄荷醇含量的水蒸氣蒸餾法提取得到的薄荷油樣品5份，分別加入2.3.1項下薄荷醇對照品適量進行測定，並計算回收率，結果平均回收率為97.34%，RSD為2.05%。
2.3.9 樣品含量測定按上述色譜條件，對2.3.2項下的樣品溶液進行測定。結果見表1。由表1可知，四種提取方法得到的薄荷油中薄荷醇含量高低順序依次為：超聲波法>冷浸法>水蒸氣蒸餾法>超臨界CO2法。薄荷醇得率的大小順序為：超臨界CO2法>超聲波法>冷浸法>水蒸氣蒸餾法。
表1 不同提取方法提取的薄荷油中薄荷醇含量的比較（略）
薄荷醇得率(%)=出油率×薄荷醇含量×100%
3 討論
冷浸法和超聲波法提取薄荷油的出油率和薄荷醇含量都比水蒸氣蒸餾法高。在薄荷油的現實生產，通常采用水蒸氣蒸餾法進行生產，因為冷浸法和超聲波法都使用了有機溶劑，容易造成溶劑殘留。另外，水蒸氣蒸餾法提取相對操作簡單，成本較低，因此在生產中應用較廣。
4種提取方法中，超臨界CO2法提取薄荷油的出油率最高。這是因為超臨界CO2提取過程在密閉系統中進行，且操作溫度低，因此萜烯類成分不易損失，熱不穩定性成分及易氧化的組分也不會受到破壞，同時部分高沸點的成分也被提取出來。
薄荷油的提取，不但要考慮主要有效成分含量，而且要考慮它的得率。在超臨界CO2法提取中，薄荷油中薄荷醇含量較低，但由於出油率高，因此薄荷樣品中薄荷醇得率比其它提取方法高。
超臨界CO2提取的薄荷油出油率和薄荷醇得率高，而且具有操作溫度低、無毒害、效率高、操作簡單等優點，能夠保證有效成分及產品質量的穩定性及安全性，同時又不會對環境造成汙染。因此，薄荷油的4種提取方法中，超臨界CO2提取法是最理想的方法。
參考文獻
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