問題二：分子雜交技術的幾種常見的雜交 分子雜交是通過各種方法將核酸分子固定在固相支持物上，然後用放射性標記的探針與被固定的分子雜交，經顯影後顯示出目的DNA或RNA分子所處的位置。根據被測定的對象，分子雜交基本可分為以下幾大類：(1) Southern雜交:DNA片段經電泳分離後,從凝膠中轉移到硝酸纖維素濾膜或尼龍膜上,然後與探針雜交。被檢對象為DNA,探針為DNA或RNA。(2) Northern雜交:RNA片段經電泳後,從凝膠中轉移到硝酸纖維素濾膜上,然後用探針雜交。被檢對象為RNA,探針為DNA或RNA。根據雜交所用的方法,另外還有斑點(dot)雜交、狹槽(slot)雜交和菌落原位雜交等。有3種固相支持體可用於雜交:硝酸纖維素濾膜、尼龍膜和Whatman 541濾紙。不同商標的尼龍膜需要進行不同的處理，在DNA固定和雜交的過程中要嚴格按生產廠家的說明書來進行。Whatman 541濾紙有很高的濕強度,最早用於篩選細菌菌落。該濾紙主要用於篩選壹些基因文庫。固定化DNA的雜交條件基本與使用硝酸纖維素濾膜時所建立的條件相同。Whatman 541濾紙與硝酸纖維素濾膜相比有壹些優點:它更便宜,雜交中更耐用,幹燥過程中不易變形和碎裂等。然而若變性過程不小心,雜交信號的強度會明顯弱於用硝酸纖維素濾膜時所得到的信號強度。因此,常規的細菌篩選和各種雜交時仍選用硝酸纖維素濾膜作為固相支持體。 Southern雜交可用來檢測經限制性內切酶切割後的DNA片段中是否存在與探針同源的序列,它包括下列步驟:(1) 酶切DNA, 凝膠電泳分離各酶切片段,然後使DNA原位變性。(2) 將DNA片段轉移到固體支持物(硝酸纖維素濾膜或尼龍膜)上。(3) 預雜交濾膜,掩蓋濾膜上非特異性位點。(4) 讓探針與同源DNA片段雜交,然後漂洗除去非特異性結合的探針。(5) 通過顯影檢查目的DNA所在的位置。Southern雜交能否檢出雜交信號取決於很多因素,包括目的DNA在總DNA中所占的比例、探針的大小和比活性、轉移到濾膜上的DNA量以及探針與目的DNA間的配對情況等。在最佳條件下,放射自顯影曝光數天後, Southern雜交能很靈敏地檢測出低於0.1pg與32 P標記的高比活性探針的(>109 cpm/μg)互補DNA。如果將10μg基因組DNA轉移到濾膜上，並與長度為幾百個核苷酸的探針雜交,曝光過夜,則可檢測出哺乳動物基因組中1kb大小的單拷貝序列。將DNA從凝膠中轉移到固體支持物上的方法主要有3種:(1)毛細管轉移。本方法由Southern發明,故又稱為Southern轉移(或印跡)。毛細管轉移方法的優點是簡單,不需要用其他儀器。缺點是轉移時間較長,轉移後雜交信號較弱。(2)電泳轉移。將DNA變性後,可電泳轉移至帶電荷的尼龍膜上。該法的優點是不需要脫嘌呤/水解作用,可直接轉移較大的DNA片段。缺點是轉移中電流較大,溫度難以控制。通常只有當毛細管轉移和真空轉移無效時,才采用電泳轉移。(3) 真空轉移。有多種真空轉移的商品化儀器,它們壹般是將硝酸纖維素膜或尼龍膜放在真空室上面的多孔屏上,再將凝膠置於濾膜上,緩沖液從上面的壹個貯液槽中流下,洗脫出凝膠中的DNA,使其沈積在濾膜上。該法的優點是快速,在30分鐘內就能從正常厚度(4-5mm)和正常瓊脂糖濃度(>
問題三：什麽叫做DNA分子雜交技術 DNA分子雜交的基礎是，具有互補堿基序列的DNA分子，可以通過堿基對之間形成氫鍵等，形成穩定的雙鏈區。
在進行DNA分子雜交前，先要將兩種生物的DNA分子從細胞中提取出來，再通過加熱或提高pH的方法，將雙鏈DNA分子分離成為單鏈，這個過程稱為變性。然後，將兩種生物的DNA單鏈放在壹起雜交，其中壹種生物的DNA單鏈事先用同位素進行標記。如果兩種生物DNA分子之間存在互補的部分，就能形成雙鏈區。由於同位素被檢出的靈敏度高，即使兩種生物DNA分子之間形成百萬分之壹的雙鏈區，也能夠被檢出。
問題四：生物.基因工程. ①DNA分子雜交與分子雜交的區別 ②雜交帶到底是什麽 ③農桿菌除了有T-DN 1DNA分子雜交屬於分子雜交的壹種
2、雜交帶有很多種，比如DNA分子雜交中探針與未標記的DNA單鏈形成的雜交帶
3、TDNA是Ti質粒上的，而質粒是遊離於擬核之外的