牛肉膏 3 克
蛋白腖 10 克
氯化鈉 5 克
瓊脂 15-20 克
水 1000 毫升
H 7.4-7.6
< p>III.儀器牛肉膏、蛋白腖、NaCl、瓊脂；
1mol/L NaOH、1mol/L HCl；
試管、三角燒瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、分液器、扭力天平、羊羹、高壓滅菌器、pH 紙（pH 5.5-9.0）、棉花、牛皮紙及其他材料。棉花、牛皮紙、記號筆、麻繩、紗布等。
四、操作步驟
1.稱量
按培養基配方比例依次準確稱取牛肉膏、蛋白腖、NaCl放入燒杯中。牛肉膏常用玻璃棒挑取，置於小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶解後倒入燒杯中。也可將牛肉膏放在稱重紙上，稱重後直接放入水中，這時如果稍加加熱，牛肉膏就會與稱重紙分離，然後立即將稱重紙取下。蛋白腖極易吸潮，應迅速稱量。另外，稱量藥品時要防止混藥，壹個角勺稱量壹種藥品，或稱量壹種藥品後，洗凈、晾幹，再稱量另壹種藥品，瓶蓋也不能搞錯。
2.溶解
在上述燒杯中，可先加入少於規定量的水，用玻璃棒攪拌，然後，放在石棉網上加熱溶解。待藥物完全溶解後，再補充水至所需的總體積。若配制固體培養基，則將稱量好的瓊脂放入溶解好的藥物中，然後加熱溶解，在瓊脂溶解過程中，需不斷攪拌，以防瓊脂糊燒杯底破裂。最後補足失去的水分。
3.調節 pH 值
調節 pH 值之前，先用精密 pH 試紙測量培養基的原始 pH 值，如果 pH 值偏酸，則用滴管向培養基中逐滴加入 1mol/L NaOH，邊加邊攪拌，並隨時用 pH 試紙測量 pH 值，直到 pH 值達到 7.6。而不是用 1mol/L HCl 進行調節。註意 pH 值不要調得過高，以免回調，否則會影響培養基中各離子的濃度。
對於壹些需要更精確 pH 值的微生物，可使用酸度計進行 pH 值調整（使用方法請參閱相關說明）。
4.過濾
趁熱用濾紙或多層紗布過濾，便於觀察結果。壹般無特殊要求，可省略此步驟（本實驗不需要過濾）。
5.分裝
根據實驗要求，可將配制好的培養基分裝到試管或三角燒瓶中。分裝裝置如圖五-1所示。
分裝過程中，註意不要使培養基沾在試管口或瓶口上，以免沾汙棉塞，造成汙染。
（1）液體分裝時分裝高度以試管高度的 1/4 左右為宜。
（2）固體分裝分裝試管，其分裝量不超過試管高度的1/5，滅菌後做成斜面，如圖五-2所示。三角燒瓶的分裝量以不超過三角燒瓶容積的壹半為宜。
（3）半固體分裝試管壹般以試管高度的1/3為宜，滅菌後垂直待冷凝。
6.加塞
培養基分裝後，試管口或三角燒瓶口用棉塞塞住，防止外界微生物進入培養基造成汙染，並保證有良好的通氣性能（棉塞制作方法附在本實驗後面）。
7.包紮
插好棉塞後，用麻繩將所有試管捆紮好，再在棉塞上包壹層牛皮紙，以防滅菌時棉塞被冷凝水浸濕，外面再用麻繩捆紮好。用記號筆標明培養基名稱、組別、日期。帶塞子的三角燒瓶，外面用牛皮紙包好，用麻繩打成活結狀，使用時便於解開，同樣用記號筆標明培養基名稱、組別、日期。
8.滅菌
上述培養基應在 1.05kg/cm2（15 磅/平方英寸）、121.3℃下高壓滅菌 20 分鐘。如果因特殊情況不能及時滅菌，應將培養基存放在冰箱中。
9.擱置斜面
將滅菌後的試管培養基冷卻至50℃左右，將試管棉塞的壹端擱置在玻璃棒上，擱置斜面的長度以不超過試管總長度的壹半為宜。
10.無菌檢查
將滅菌後的培養基放入37℃溫室中培養24-48小時，以檢查滅菌是否完全。
附：棉塞的制作
棉塞的作用有兩個：壹是防止雜菌汙染；二是保證通氣良好。因此，棉塞的質量對實驗結果影響很大。正確的棉塞要求形狀、大小、松緊度與試管口（或三角燒瓶口）完全相適應，過緊妨礙空氣流通，操作不便；過松達不到濾菌的目的。加塞時，應使塞長的1/3在試管口外，2/3在試管口內，如圖V-3。棉塞的制作過程，如圖V-4。
另外，在微生物實驗和科學研究中，經常用到通氣塞。所謂通氣塞，就是幾層紗布（壹般為8層）相互重疊，或在兩層紗布之間均勻鋪上壹層棉花而成。這種通氣塞通常加在裝有液體培養基的三角燒瓶口上。接種後，將其放在搖床上進行振蕩培養，以獲得良好的通氣性，促進細菌的生長或發酵。通氣塞的形狀