膽酸 取牛黃細粉約 0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 50ml，密塞，稱定，超聲處理 30 分鐘，再稱定，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過、精密量取濾液 25 毫升，蒸幹，殘渣中加入 10 毫升 20%氫氧化鈉溶液，加熱回流 2 小時，冷卻，加入 19 毫升稀鹽酸調節 pH 值至酸性，用乙酸乙酯除去。再加 19ml 稀鹽酸調 pH 至酸性，用乙酸乙酯萃取 4 次（25ml、25ml、20ml、20ml），每次乙酸乙酯溶液均濾過，濾過液同樣鋪少量無水硫酸鈉於脫脂棉上，合並萃取液，蒸幹，殘渣用甲醇溶解後移入 10ml 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另精密稱取在 105℃幹燥至恒重的膽汁酸對照品，加甲醇制成每 1ml 含 0.48mg 的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（附錄Ⅵ B）試驗，精密吸取供試品溶液 2μl，對照品溶液 1μl 和 3μl，分別點於同壹矽膠 G 薄層板上，以異辛烷-乙酸丁酯-冰醋酸-甲酸（8：4:2:1）為展開劑，展開至 14 ～ 17cm，取出，晾幹，噴以 30%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點顏色清晰，取出，105℃下蓋上薄層板，再噴以乙醇。取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃片，四周用膠帶固定，按薄層色譜法（附錄 VIB 薄層掃描法）進行掃描，波長：λ<[S]>=380nm，λ<[R]>=650nm，測定供試品的吸光度積分值和對照品的吸光度積分值，計算，即得。
本品按幹品計算，含膽酸（C24H40O5）不得少於4.0%。
膽紅素對照品溶液的制備 取膽紅素對照品約 10 毫克，精密稱定，置 100 毫升棕色燒瓶中，加氯仿溶解稀釋至刻度，搖勻，精密取 5 毫升，置 50 毫升棕色燒瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得（每 1 毫升含膽紅素 0.01 毫克）。制備標準曲線：取對照品溶液 1.0 ml、2.0 ml、3.0 ml、4.0 ml、5.0 ml，置具塞試管中，加乙醇至 9 ml，加入重氮化液（A 液：取對氨基苯磺酸 0.1 g，加鹽酸 1.5 ml，加水配成 100 ml；B 液：取亞硝酸鈉 0.5 g，加水配成 100 ml，置冰箱中保存。100毫升，放入冰箱保存。使用時，取甲液 10ml，乙液 0.3ml，混勻）1ml，搖勻，置 15-20 ℃暗處 1 小時，以相應試劑作空白，按分光光度法（附錄 VB），在 533nm 波長處測吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
測定方法 取約 10mg 的粉末，精密稱定，置於錐形瓶中，加入氯仿和乙醇（7:3）的混合物 60ml，鹽酸 1 滴，搖勻，置水浴中加熱回流約 30 分鐘，冷卻，移入 100ml 棕色量瓶中。用少量混合溶液沖洗容器，並倒入量瓶中，加入上述混合溶液至刻度，搖勻。精密量取 10 毫升上清液，放入 50 毫升棕色量瓶中，加入乙醇至刻度，搖勻。精密量取 3ml，置具塞試管中，按下法制備標準曲線，自 "加乙醇至 9ml"，依法測定吸收度，由標準曲線讀出試液中膽紅素的重量（mg），計算，即得。
本品按幹燥品計算，含膽紅素（C33H36N4O6）不得少於35.0%。