(1) 直接培養法：該方法適用於 BOD5 值不超過 7mg/L 的水樣。該方法適用於 BOD5 值不超過 10mg/L 的水樣，也適用於 BOD5 值不超過 7mg/L 的水樣。
（2）稀釋培養法：壹般水樣 BOD5 在 10mg/L 以上采用此法。
（3）瞬時需氧量測定法。對於含有硫化物、亞硫酸鹽、亞鐵等還原性無機物的水樣，有時需要測定瞬時需氧量（1DOD）。壹般來說，這壹步可以省略。
110.1.3.5影響 BOD 稀釋水純度的因素
所謂 BOD，是指水樣中有機物生化分解所消耗的氧量。它是水樣在壹定溫度（20℃）下，在密閉容器中保存壹定時間（壹般為 5 天）後溶解氧減少的表示。當耗氧量超過水樣中的溶解氧時，需要用制備的飽和 "稀釋水 "將水樣適當稀釋，然後測定耗氧量。因此，稀釋水的純度是影響結果的重要因素。根據實驗研究認為，以下因素不容忽視。
（1）稀釋水的BOD空白值
在沒有控制實驗條件的情況下，按常規方法測定81個稀釋水的BOD值，這些數據為統壹線處理，最小值為O.01mg/L，最大值為1.06mg/L，且測定值為橫坐標，檢測頻率為縱坐標的%，在半對數坐標圖中，只有34.6%的測定數據在0.2mg/L。只有 34.6% 的測定數據在 0.2mg/L 以下。
本實驗結果表明，制備BOD稀釋水時，沒有控制好實驗條件，而是受到實驗室中有機溶劑、空氣中粉塵和細菌的汙染，導致．B005 值增大。這就必須嚴格控制實驗條件，使BOD5值達到規定的O.2mg/L的要求。
（2）BOD稀釋水源對BOD5值的影響
用加入KMnO4的重蒸餾水和普通蒸餾水，分別裝入培養瓶中在20～25℃下保存，逐日置於培養箱中20±l℃，按常規分析方法測定BOD5，結果表明，兩種稀釋水從第四天開始均達到0.2mg / L 結果表明，兩種稀釋水從第四天開始均能達到 0.2mg/L，無明顯差異。國外報道采用蒸餾水、離子交換後蒸餾水和蒸餾後離子交換水三種***水，在20℃下保存，逐日測定B005值，同日測定BOD5值的結果順序如下：
蒸餾後離子交換水>離子交換後蒸餾水>蒸餾水，僅蒸餾水配制的稀釋水BOD5值達0.2mg/L以下。可見，BOD稀釋水源的選擇非常重要，離子交換水易受樹脂床汙染，不宜使用，而壹般以蒸餾水作為BOD稀釋水源，其空白值可達到規定要求。
（3）溫度對BOD稀釋水的影響
將制備好的BOD稀釋水，分裝到BOD培養瓶中，在15℃、20℃、22-25℃和30-34℃四種不同溫度下保存，按常規測定BOD5的方法，選擇最佳保存天數。15℃保存從第五天開始，20℃保存從第五天開始，20℃保存天數最佳。15℃時從第五天開始保存，20℃時從第二天開始保存，20-25℃時從第四天開始保存，30-34℃時從第五天開始保存，分別可達0.2mg/L.
實驗證明，溫度無疑對BOD稀釋水的BOD5值有顯著影響。BOD稀釋水以20±1℃條件下保存最佳。如果實驗室受條件限制，可根據不同溫度確定保存時間。
實驗表明，最簡便的方法是將配制好的稀釋水在常溫下保存5-7天，BOD即可完全達到規定要求。
（4）曝氣過程對BOD5值的影響
用新鮮蒸餾水配制的BOD稀釋水，壹種用活性炭過濾空氣曝氣，另壹種不過濾，在20℃時分別倒入BOD培養瓶中，置於20±1℃的培養箱中進行保存，按常規方法逐日測定BOD5值。
用活性炭過濾的稀釋水，當日的BOD5為O.15mg/L，不用活性炭過濾的稀釋水當日的BOD為0.25mg/L，結果表明，活性炭對空氣中汙染物的吸附處理，明顯改善了稀釋水的水質。
（5）硝化作用對稀釋水BOD5值的影響
稀釋水配制時加入氯化銨作為細菌生長所需的氮源。細菌利用硝化作用增加耗氧量，導致：B005 值升高。有人提出添加壹定量的硝化抑制劑：如 N（2 壹丙烯基）硫脲、2 壹氯 6（三氯乙烷）吡啶和烯丙基硫脲等，以抑制細菌對含氮化合物的硝化作用。曾用過的含氯化銨的BOD稀釋水D1，分裝在培養瓶中，其中兩份用於測定含氮化合物，其余兩份測定BOD5值，同時放在20℃條件下保存，逐日分別測定BOD5、NH3-N、N02-N、N03-N含量。另將不含氯化銨的稀釋水 D2 分裝到培養瓶中，每次兩份，在 20℃條件下保存。逐日測定含氯化銨和不含氯化銨的稀釋水的 BOD5 值，從第 2 天起至第 12 天，BOD5 值均低於 0.2 mg/L。兩組之間沒有明顯差異。同時，氨氮含量隨著培養天數的增加而下降。從第 6 天開始，N02-N 的檢測濃度為 0.8 μg/L，第 2l 天檢測到的濃度為 O.2 μg/L，濃度很小；第 9 天檢測到的 N03-N 濃度為 3.2 μg/L，第 21 天檢測到的濃度為 3.16 μg/L，這表明硝化作用的影響很小，可以忽略。因此，在 BOD 稀釋水的保存中，不必擔心硝化作用的發生。
BOD稀釋水的純度是壹個重要因素。因此，國外提倡稀釋水的BOB5值要求控制在0.2mg/L以下，最好為0.1mg/L。
110.1.3.6 接種的目的是使樣品中的生物群加入，以提高水中有機物的分解能力，在生活廢水或未加氯的排放水及地下水中存在這些微生物時，就沒有必要接種，也不應該接種。當水樣中的微生物數量很少時，則應接種稀釋水，所用的標準接種物是已在 20℃條件下存放 24～36h 的澄清生活汙水。
根據理論推算，1mg氨氮氧化需要消耗4.57mg氧氣，其中生成亞硝酸鹽氮需要消耗3.43mg氧氣，亞硝酸鹽氮轉化為硝酸鹽氮需要消耗1.14mg氧氣。
日本出廠排水試驗方法JLSK0102中規定，每稀釋1升水樣需加入N-（丙烯酰）硫脲0.2～O.5mg，或在1升稀釋水中加入2-氯-6-（三氯乙烯）吡啶10mg，以抑制硝化過程。
110.1.5 水樣采集後應立即進行分析。在取樣與分析之間的貯存期內，樣品有明顯的降解，會影響 BOD 值。如果在 15-20 ℃條件下放置幾小時，BOD 含量可降低二分之壹。在冷凍條件下存放 3 天，BOD 值可降低 5%。日本的 "水質測試法 "規定水樣在密封冷藏條件下必須在 9h 內測定。
美國《水和廢水標準測試法》第15版規定，樣品采集後2h內不能分析時，應將樣品貯存在4~C或4~C以下，並在6h內開始分析，當6h內不能分析時，應將貯存時間和溫度隨分析結果壹起上報，不能分析超過24h。
110.1.6.1 樣品的前處理
（壹）含有懸浮物質的樣品，混勻後，取適量進行分析。
（二）冬季取水樣，降溫保存含氧量較高，藻類、河流、湖泊由於光合作用也含較多的氧，註意夏季易使溶解氧過飽和，對水樣中其他溶解氣體應進行曝氣處理。
（3）中和：將呈酸性或堿性的水樣用 NaOH 溶液[c（NaOH）=1 mol/L] 或用 H2S04 溶液[c（H2S04）=0.5 mol/L]中和至 pH 7 左右。
（4）水樣含余氯 0.1mg/L 時，短時間內有時會消失。氯含量高時除用硫代硫酸鈉外，還可用下列方法去除。
在 100mL 水樣中預先加入 0.1gNaN3 和 lg Ⅺ，然後加入 HCl 使 pH 值約為 1，以澱粉溶液為指示劑，用亞硫酸鈉溶液[c(Na2S03)=0.025mol/L]滴定遊離的 12，直至藍色消失。另外，取樣按預滴定值，加入適量亞硫酸鈉溶液，使余氯還原，必要時可用NaOH溶液（4Og/L）或鹽酸溶液（1+1）調節pn值至7左右。
（5）重金屬鹽類具有抑制微生物生長的作用，影響BOD值。
日本弘抱正報道各種金屬離子濃度對BOD的抑制作用分別為（mg/L）：
Hg2+-0.5、Cu2+-0.5、Pb2+-50、Ni2+-5、Zn2+-10-20、Cr3+-2.5-5.O、Cr6+-10、Cd2+-5、C02+-5，這些金屬離子可通過中和、沈澱和離子交換等方法消除。
（6）當水中亞硝酸鹽大於 O.1mg/L時，可遊離碘使結果偏高
2I-+2NO2-+4H+→I2+2H20+2NO
加入疊氮化鈉消除亞硝酸鹽的幹擾反應如下
2NaN3+H2S04- 2HN3+Na2S04
HN3+HNO2→N2+N20+H20
（7）含有其他有毒物質的水樣、通常需要進行特殊研究和處理。
110.1.6.3確定水樣的稀釋程度
由於水中有機物含量較高，為了確定 BOD 的稀釋程度，首先需要測定耗氧量或化學需氧量的值，然後推測 BOD 的值，為了防止失效，通常采用不同階段的稀釋法。
按酸性高錳酸鉀法測定的耗氧量（OC）通常為l～3，此外還需將水樣的商數稀釋倍。
如果用重鉻酸鉀法測定化學需氧量（COD），則除以 4 或 5。
110.1.6.3.2生化需氧量測定操作中應註意：
（1）為了測定的可靠性，最好同時培養 2～3 瓶，由測定值取平均值。
（2）稀釋用的計量瓶和BOD培養瓶應充分洗凈，因為稀釋度高，即使輕微汙染，也會影響BOD值。
（3）稀釋時，用虹吸管將水樣和稀釋水插入容器底部，輕輕流動，防止產生氣泡。
（4）裝有樣品的 BOD 培養瓶內不能有氣泡，蓋好瓶塞，封好瓶口，瓶內不能存在氣泡。
110.1.7.3壹般認為已稀釋的培養液在20℃溫度下培養5天後，溶解氧降低40～70%較為適宜。減量過多或過少都會帶來較大誤差，因此壹個水樣應同時做 2～3 次稀釋，最後只用溶解氧減量在 40%～70% 之間的平均值為結果。
下表顯示了不同稀釋度下的 BOD5 值。
表 110.1 不同稀釋度的 BOD5 值*
*葡萄糖和谷氨酸鈉各 150 毫克/升；
***1 升稀釋試樣的數量、毫升數。
從表 110.1 可以看出，稀釋 67 至 40 倍時，耗氧率為 41.4%至 69%所產生的 BOD5 值最好，用三者的平均值 227+213+227/3=222mg/L 來報告結果。
110.1.8精度
根據數據，BOD重復測量的精度在5%～10%之間，不同時間測量的精度在15%～30%之間
。