第壹章 基因工程
（江蘇卷）18．下列關於轉基因植物的敘述。正確的是
A．轉入到油菜的抗除草劑基因，可能通過花粉傳人環境中
B．轉抗蟲基因的植物．不會導致昆蟲群體抗性基因擷宰增加
C．動物的生長激素基因轉人植物後不能表達
D．如轉基因植物的外源基因來源於自然界，則不存在安全性問題
解析：轉入到油菜的基因，可以通過花粉傳入環境中，A項正確；由於植物與害蟲間是相互選擇的，轉抗蟲基因植物可使昆蟲群體抗性基因頻率增加，B項錯誤；動物生長素基因轉入植物後也能表達，C項錯誤；轉基因技術的安全性問題，要通過驗證才能得到證實，D項錯誤。
答案：A
（全國卷二）5、下列敘述符合基因工程概念的是
A、B淋巴細胞與腫瘤細胞融合，雜交瘤細胞中含有B淋巴細胞中的抗體基因
B、將人的幹擾素基因重組到質粒後導入大腸桿菌，獲得能產生人幹擾素的菌株
C、用紫外線照射青黴菌，使其DNA發生改變，通過篩選獲得青黴素高產菌株
D、自然界中天然存在的噬菌體自行感染細菌後其DNA整合到細菌DNA上
解析：基因工程是把壹個外源的基因導入到細胞內，從而培育出轉基因生物，是在基因水平上操作的。A為細胞工程，B為基因工程，C為人工誘變，D為自然基因重組。
答案：B
(浙江卷)2．在用基因工程技術構建抗除草劑的轉基因煙草過程中，下列操作錯誤的是
A．用限制性核酸內切酶切割煙草花葉病毒的核酸
B．用DNA連接酶連接經切割的抗除草劑基因和載體
C．將重組DNA分子導入煙草原生質體
D．用含除草劑的培養基篩選轉基因煙草細胞
解析：煙草花葉病毒的核酸是RNA，限制性核酸內切酶不能識別該序列，不能對其進行切割。
答案：A
（浙江卷）6．將無根的非洲菊幼苗轉入無植物激素的培養基中，在適宜的溫度和光照等條件下培養壹段時間後，應出現的現象是[來源:學+科+網][來源:學科網ZXXK]
解析：培養基中無植物激素，但是植物幼苗葉片本身可以產生生長素，而細胞分裂素的產生部位在根尖，所以無根的幼苗不能產生細胞分裂素，在培養的過程中，可以長出少量的根而沒有產生芽。
答案：B
（江蘇卷）27．（8分）下表中列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點，圈l、圈2中箭頭表示相關限制酶的酶切位點。請回答下列問題：
（1）壹個圖1所示的質粒分子經Sma Ⅰ切割前後，分別含有 個遊離的磷酸基團。
（2）若對圖中質粒進行改造，插入的SmaⅠ酶切位點越多，質粒的熱穩定性越 。
（3）用圖中的質粒和外源DNA構建重組質粒，不能使用Srna Ⅰ切割，原因是 。
（4）與只使用EcoR I相比較，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ兩種限制酶同時處理質粒、外源DNA的優點在於可以防止 。
（5）為了獲取重組質粒，將切割後的質粒與目的基因片段混合，並加入 酶。
（6）重組質粒中抗生素抗性基因的作用是為了 。
（7）為了從cDNA文庫中分離獲取蔗糖轉運蛋白基因，將重組質粒導入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，然後在 的培養基中培養，以完成目的基因表達的初步檢測。
解析：（1）質粒切割前是雙鏈環狀DNA分子，所有磷酸基團參與形成磷酸二酯鍵，故不含遊離的磷酸基團。從圖1可以看出，質粒上只含有壹個SmaⅠ的切點，因此被改酶切割後，質粒變為線性雙鏈DNA分子，因每條鏈上含有壹個遊離的磷酸基團，因此切割後含有兩個遊離的磷酸基團。
（2）由題目可知，SmaⅠ識別的DNA序列只有G和C，而G和C之間可以形成三個氫鍵，A和T之間可以形成二個氫鍵，所以SmaⅠ酶切位點越多，熱穩定性就越高
（3）質粒抗生素抗性基因為標記基因，由圖2可知，標記基因和外源DNA目的基因中均含有SmaⅠ酶切位點，都可以被SmaⅠ破壞，故不能使用該酶剪切含有目的基因的DNA
（4）只使用EcoR I，則質粒和目的基因兩端的粘性末端相同，用連接酶連接時，會產生
質粒和目的基因自身連接物，而利用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ剪切時，質粒和目的基因兩端的粘性末端不同，用DNA連接酶連接時，不會產生自身連接產物。
（5）質粒和目的基因連接後獲得重組質粒，該過程需要連接酶作用，故混合後加入DNA連接酶。
（6）質粒上的抗性基因為標記基因，用於鑒別和篩選含有重組質粒的受體細胞。
（7）將重組質粒導入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體後，含有重組質粒的個體才能吸收蔗糖，因此可利用蔗糖作為唯壹碳源的培養基進行培養受體細胞，含有重組質粒的細胞才能存活，不含有重組質粒的因不能獲得碳源而死亡，從而達到篩選目的。
答案：（1）0、2 （2）高 （3）SmaⅠ會破壞質粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因
（4）質粒和含目的基因的外源DNA片段自身環化 （5）DNA連接
（6）鑒別和篩選含有目的基因的細胞 （7）蔗糖為唯壹含碳營養物質
第二章細胞工程
（廣東卷）22．新技術的建立和應用對生物學發展至關重要。下列技術（或儀器）與應用匹配正確的是
A．技術——擴增蛋白質
B．雜交瘤技術——制備單克隆抗體
C．光學顯微鏡——觀察葉綠體的基粒
D．花粉離體培養——培育單倍體植物
解析：本題主要考查學生的理解能力。PCR技術只能用來擴增核酸，不能用來擴增蛋白質；利用光學顯微鏡無法觀察到葉綠體的內部結構。
答案：BD
（寧夏卷）38．[生物——選修模塊3：現代生物科技專題](15分) 請回答：
（1）植物微型繁殖技術屬於植物組織培養的範疇。該技術可以保持品種的 ，繁殖種苗的速度 。離體的葉肉細胞在適宜的條件下培養，最終能夠形成完整的植株，說明該葉肉細胞具有該植物的全部 。
(2)把試管苗轉接到新的培養基上時，需要在超凈工作臺上進行，其原因是避免
的汙染。
（3）微型繁殖過程中，適宜濃度的生長素單獨使用可誘導試管苗 ，而與
配比適宜時可促進芽的增殖。若要抑制試管苗的生長，促使愈傷組織產生和生長，需要使用的生長調節劑是 (脫落酸、2，4-D)。
（4）將某植物試管苗培養在含不同濃度蔗糖的培養基上壹段時間後，單株鮮重和光合作用強度的變化如圖。據圖分析，隨著培養基中蔗糖濃度的增加，光合作用強度的變化趨勢是 ，單株鮮重的變化趨勢是 。據圖判斷，培養基中不含蔗糖時，試管苗光合作用產生的有機物的量 (能、不能)滿足自身最佳生長的需要。
(5)據圖推測，若要在誘導試管苗生根的過程中提高其光合作用能力，應 (降低，增加)培養基中蔗糖濃度，以便提高試管苗的自養能力。
解析：植物組織培養技術是利用植物細胞全能性的原理進行的，是植物細胞工程的基礎，在操作過程中應註意無菌操作，避免雜菌汙染，因為培養過程中使用的培養基營養物質豐富，適宜濃度的生長素可以誘導試管苗生根，而如果要促進愈傷組織形成芽，則需要與細胞分裂素配比。促進愈傷組織產生和生長應該使用生長素類似物——2，4-D。
答案：（1）遺傳特性 快 遺傳信息 （2）微生物 （3）生根 細胞分裂素 2，4-D （4）逐漸減小 先增加後下降 不能 （5）降低
（浙江卷）4．下列關於動物細胞培養的敘述，正確的是
A．培養保留有的細胞在培養瓶壁上可形成多層細胞
B．克隆培養法培養過程中多數細胞的基因型會發生 改變
C．二倍體細胞的傳代培養次數通常是無限的
D．惡性細胞系的細胞可進行傳代培養
解析：動物細胞培養可分為原代培養和傳代培養，原代培養到壹定程度後要進行傳代，因為細胞有接觸抑制現象，當細胞接觸時就會停止分裂(在細胞培養過程中進行的為有絲分裂，所以培養出來的多數細胞基因型相同)，但是細胞在培 養過程中，傳代次數也是有限的，壹般為50次就會死亡，留下來的細胞就是發生了癌變的細胞，遺傳物質發生改變，具有不死性，但是仍保留接觸抑制現象，所以還是要傳代培養，這個也就是人體中癌細胞會轉移的原因，所以答案為D.
答案：D
（福建卷）32.[生物-現代生物科技專題]（10分）
紅細胞生成素（EPO）是體內促進紅細胞生成的壹種糖蛋白，可用於治逆子療腎衰性貪血等疾病。由於天然EPO來源極為有限，目前臨訂、床上使用的紅細胞生成素主要來自於基因工程技術生產的重組人紅細胸生成素（rhEPO），其簡要生產流程如右圖。
請回答：
（1）圖中①所指的是 技術。
（2）圖中②所指的物質是 ，③所指的物質是 。
（3）培養重組CHO細胞時，為便於清除代謝產物，防止細胞產物積累對細胞自身造成危害，應定其更換 。
（4）檢測rhEPO的體個活性需要抗rhEPO的單克隆抗體。分泌該單克隆抗體的 細胞，可由rhEPO免疫過的小鼠B淋巴細胞與小鼠骨髓癌細胞融合而成。
解析：獲取目的基因的方法有三種（從基因文庫中獲取、用PCR 擴增技術、人工合成）。圖中①以核DNA為模板獲得目的基因的方法為PCR技術。進行反轉錄的模板是mRNA。由題意可知重組CHO細胞適用於生產重組人紅細胞生成素(rhEPO），所以重組CHO細胞能過表達出重組人紅細胞生成素(rhEPO）或者紅細胞生成素。培養動物細胞是用液體培養基——即培養液，細胞從培養液中吸收營養，並同時向培養液中排放代謝廢物，當代謝廢物積累時會危害細胞，因此要不斷更新培養液。制備單克隆抗體是讓淋巴B細胞與骨髓瘤細胞融合成雜交瘤細胞，然後由雜交瘤細胞來分泌抗體。
答案：（1）PCR （2）m RNA rhEPO (3)培養液 （4）雜交瘤
第三章 胚胎工程
（江蘇卷）16．下列關於利用胚胎工程技術繁殖優質奶羊的敘述．錯誤的是
A．對受體母羊與供體母羊進行同期發情處理
B．人工授精後的壹定時間內，收集供體原腸胚用於胚胎分割
C．利用胚胎分剖技術可以獲得兩個基因型完全相同的胚胎
D．壹次給受體母羊檀人多個胚胎．可增加雙胞胎和多胞胎的比例
解析：本題考查了胚胎工程及考生理解問題的能力。進行胚胎分割要用囊胚或桑椹胚期的胚胎，B項錯誤。
答案：B
（江蘇卷）17．老年癡呆癥患者的腦血管中有壹種特殊的β壹澱粉樣蛋白體，它的逐漸積累可能導致神經元損傷和免疫功能下降．某些基因的突變會導致β壹澱粉樣蛋白體的產生和積累。下列技術不能用於老年癡呆癥治療的是
A．胚胎移植技術 B．胚胎幹細胞技術
C．單克隆抗體技術 D．基因治療技術
解析：本題考查了現代生物技術的應用。采用胚胎幹細胞技術可以產生新的神經元細胞，單克隆抗體技術定向改善免疫能力，基因治療技術可以從基因水平對老年癡呆進行治療，而胚胎移植技術則不能治療老年癡呆，正確選項為A
答案：A
（天津卷）7.（26分） Ⅰ.（14分）下圖是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的技術路線。圖中tetR表示四環素抗性基因，ampR表示氨芐青黴素抗性金銀，BamHI、HindIII、SmaI直線所示為三種限制酶的酶切位點。
據圖回答：
（1）圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用 限制酶同時酶切載體和人乳鐵蛋白基因。篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含 的培養基上進行。
（2）能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細胞中特異性表達的調控序列是 （填字母代號）。
A.啟動子 B. tetR C.復制原點 D. ampR
（3）過程①可采用的操作方法是 （填字母代號）。
A.農桿菌轉化 B. 大腸桿菌轉化 C.顯微註射 D. 細胞融合
（4）過程②可采用的生物技術是 。
（5）對早期胚胎進行切割，經過程②可獲得多個新個體。這利用了細胞的 性。
（6）為檢測人乳鐵蛋白是否成功表達，可采用 （填字母代號）技術。
A.核酸分子雜交 B. 基因序列分析 C.抗原—抗體雜交 D. PCR
解析：I（1）據圖，僅將人乳鐵蛋白基因切割出來，需要在人乳鐵蛋白基因的左側用BanHI切割，右側用HindIII切割。當人乳鐵蛋白基因和質粒連接成重組質粒後，TETR基因被人乳鐵蛋白基因隔開，不是完整的，而anpR基因是完整的，所以篩選含有重組載體的大腸肝菌首先需要字含氨芐青黴素的培養基上進行。
（2）基因表達的調控序列在啟動子上。
（3）將重組質粒導入動物細胞，常采用顯微鏡的方法。
（4）過程②的左側是早期胚胎，右側是代孕牛，過程②采用的生物技術是胚胎移植。
（5）將細胞培養為個體，利用了細胞的全能性。
（6）檢測目的基因在手提細胞中是否表達，常采用抗原-抗體雜交技術。
答案：Ⅰ.（1）HindⅢ和BamHⅠ；氨芐青黴素 （2）A （3）C
（4）胚胎移植技術 （5）全能 （6）C
（海南卷）26．（18分）［選修模塊3：現代生物科技專題］
請回答胚胎工程和基因工程方面的問題：
（1）應用胚胎工程技術可以培育出“試管牛”。試管牛的培育需經過體外受精、__________、_____________以及在母體中發育和產出等過程。
（2）在“試管牛”的培育過程中，要使精子和卵母細胞在體外成功結合，需要對精子進行處理，使其__________。另外，培養的卵母細胞需要發育至減數第二次分裂的中期，該時期在顯微鏡下可觀察到次級卵母細胞和__________。
（3）通常奶牛每次排出壹枚卵母細胞，采用激素處理可使其壹次排出多枚卵母細胞，常使用的激素是__________。
（4）利用基因工程可以獲得轉基因牛，從而改良奶牛的某些性狀。基因工程的四個基本操作步驟是__________、基因表達載體的構建、__________和__________。若要獲得的轉基因牛分泌的乳汁中含有人幹擾素，則所構建的基因表達載體必須包括：某種牛乳腺分泌蛋白基因及其啟動子、__________、__________、__________和復制原點等。將該基因表達載體導入受體細胞所采用的方法是__________（顯微註射法、農桿菌轉化法），為獲得能大量產生人幹擾素的轉基因牛，該基因表達載體應導入的受體細胞是__________（受精卵、乳腺細胞）。
解析: 試管牛的培育過程是:將精子與卵子取出體外受精,將受精卵在體外培養獲得早期胚胎,將早期胚胎移植到母體內進壹步發育,成熟後從母體內產生。精子與卵子受精時，精子要經過獲能處理，卵子要發育到減數第二次分裂的中期才具備受精能力。要想使使奶牛產生更多的卵子，通常用促性腺激素處理。基因工程操作的四個基本步驟是：獲取目的基因，基因表達載體的構建、將目的基因導入受體細胞和目的基因的檢測與鑒定。培育轉基因動物時，，壹般用受精卵和胚胎幹細胞作為受體細胞，因為這些細胞的全能性最大，易培養在壹個新個體。當動物細胞作受體細胞時，壹般采用顯微註射法將目的基因導入。
答案:（1）早期胚胎培養（1分） 胚胎移植（2分）
（2）獲能 第壹極體（每空1分，***2分）
（3）促性腺激素（其他合理答案也給分）（2分）
（4）獲取目的基因（2分） 將目的基因導入受體細胞（2分）
目的基因的檢測與鑒定（2分） 人幹擾素基因（或目的基因）（1分）
終止子（1分） 標記基因（1分） 顯微註射法（1分） 受精卵（1分）
（山東理綜）35. 生物-現代生物科技專題胚胎工程是壹項綜合性的動物繁育技術，可在畜牧業和制藥業等領域發揮重要作用。下圖是通過胚胎工程培育試管牛的過程。
（1）從良種母牛采集的卵母細胞，都需要進行體外培養，其目的是_____；從良種公牛采集的精子需_____後才能進行受精作用。
（2）在體外培養受精卵時，除了給予壹定量的O2以維持細胞呼吸外，還需要提供____氣體以維持____。
（3）圖中過程A稱為_____，它在胚胎工程中的意義在於_____。
（4）研制能夠產生人類白細胞介素的牛乳腺生物反應器，需將目的的基因導入牛受精卵，最常用的導入方法是____；獲得轉基因母牛後，如果_____即說明目的基因已經表達。
解析：精子與卵子受精時，精子要經過獲能處理，卵子要發育到減數第二次分裂的中期才具備受精能力。在動物細胞培養時，要提供壹定量的O2以維持細胞呼吸，同時還要提供CO2以維持培養液的pH。
答案：（1）使卵母細胞成熟（或：使卵母細胞獲得受精能力） 獲能
（2）CO2 培養液（基）的pH （3）胚胎移植 提高優良母畜的繁殖率。
（4）顯微註射法 牛奶中含有人類白細胞介素（或：牛乳腺細胞已合成人類白細胞介素）