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脂質體在新藥開發中有哪些應用?

脂質體是壹種以磷脂雙分子層為水相核心的脂質微囊。目前,脂質體已被應用於蛋白質-生物膜相互作用、生物膜離子轉運、藥物-膜受體相互作用、模擬酶催化活性、包裹藥物和基因轉移等方面的研究。

1脂質體的結構組成

脂質體實際上是壹個術語,描述了壹些化合物的不同排列方式,其化學和物理性質變化很大。它與膠束、微乳、液晶、單分子膜、多分子膜、主-客體系統等統稱為 "分子有序組裝體",脂質體的形狀為球形,直徑大小約為幾十納米到幾十微米。根據脂質體形態結構的不同,壹般可將其分為三類:小型單室雙層脂質體、大型單室雙層脂質體和多室脂質體。單個多室脂質體的結構各不相同,有時呈球形、洋蔥狀、橢圓形或管狀等不同大小的結構。

2脂質體作為藥物載體

2.1脂質體作為藥物載體的特點

脂質體對人體的毒副作用較小,其脂質雙層膜與生物膜有較大的相似性和組織溶解性,易於被組織吸收。脂質體包裹藥物為物理過程,不改變藥物分子結構,當藥物被包裹後可降低藥物毒性,減少藥物使用量,具有緩釋和控釋作用。可包裹各種分子大小的藥物。可制備特殊性能的脂質體,如免疫脂質體、各種條件敏感脂質體等,用於靶向給藥,提高藥物療效。

2.2抗癌藥物脂質體

細胞毒性藥物對人體正常組織和病理部位均無選擇性,使用上有壹定困難,最好的辦法是使藥物直接作用於病理部位。Eric等研究表明,脂質體包裹的阿黴素比遊離藥物毒性降低50%~70%,在抑癌活性方面脂質體制劑遠高於遊離藥物。在抑癌活性方面,脂質體制劑的活性遠高於遊離藥物,用脂質體阿黴素多次治療可延長同種腫瘤動物的存活時間,而使用遊離藥物則不能延長存活時間。許多藥物如放線菌素D、絲裂黴素、甲氨蝶呤、博萊黴素、順鉑等都被包裹在脂質體中,美國FDA已批準阿黴素TLCD99脂質體、兩性黴素B脂質體、柔紅黴素脂質體進行臨床試驗。

2.3抗寄生蟲和真菌藥物脂質體

脂質體靜脈註射後可迅速被網狀內皮系統攝取,壹些寄生蟲病如利什曼原蟲和瘧原蟲進入人體後就是寄生在網狀內皮系統中。因此,可以用脂質體來包裹藥物,如五價銻治療時,藥物毒性很高,其治療劑量等於中毒劑量,當包裹在脂質體中後,治療實驗性利什曼病安全有效,其治療劑量大大降低。Das利用巨噬細胞表面存在巖藻糖受體的特點,合成了含有巖藻糖和包裹銻化合物的脂質體,治療倉鼠感染30d的利什曼原蟲;結果表明,脂質體包裹藥物的效果得到加強(抑菌率為55%),含有巖藻糖的脂質體效果更為明顯(抑菌率為72%),而未使用脂質體的藥物抑菌效果僅為26%。

2.4多肽和酶脂質體

多肽、酶都是生物大分子,它們的****,同樣的特點是在機體內不穩定,易被蛋白質水解酶降解,因而在機體內的半衰期較短,絕大多數不利於口服給藥。超氧化物歧化酶(SOD)能清除體內多余的超氧陰離子自由基損傷,Amderson在體內易被蛋白水解酶水解破壞,當包裹在脂質體中時,在機體內的半衰期明顯提高,而且脂質體能增加細胞對SOD的攝取能力,能更好地保護細胞免受自由基損傷。Amderson 等人的研究表明,皮下註射遊離 IL-2 的半衰期僅為 6 分鐘,而脂質體包裹的 IL-2 的半衰期為 68 分鐘,脂質體包裹的 IL-2 的體內分布和藥代動力學發生了很大改變。由於胃酶和胃酸的破壞作用,胰島素口服後的生物利用度較低,而脂質體包封可以克服這些缺點,口服後動物的血糖明顯下降。

3脂質體作為疫苗載體

1974年,Allison等人首次報道了脂質體作為疫苗載體的作用。首次報道了脂質體的免疫佐劑作用,Iinuna(1995)用MDP脂質體包裹流感病毒H3N2,對小鼠進行倉促免疫,可使小鼠脾細胞明顯降低、小鼠肺中病毒滴度的轉移,提示 MDP 脂質體疫苗可通過增強細胞免疫力來保護小鼠免受流感病毒的侵襲,MDP 脂質體疫苗可通過增強細胞免疫力來保護小鼠免受流感病毒的侵襲。Childers 等人從變異鏈球菌中提取葡萄糖基轉移酶(GTF)脂質體制成腸溶膠囊,給 7 名健康成人每人每天口服 500ug 3d,28d 後加強 1 次。結果顯示,5人腮腺分泌物中抗GTF的IgA1和IgA2水平均有所升高,並在第35天達到峰值,說明MDP脂質體疫苗可以口服給小鼠,這表明MDP脂質體疫苗可以通過增強細胞免疫來保護小鼠免受流感病毒的感染。結果表明,脂質體疫苗口服後可誘導機體產生分泌型go IgA抗體。脂質體作為疫苗佐劑可以增強體液免疫和細胞免疫。

4用於免疫診斷的脂質體

將熒光物質(如羧基熒光素)或酶活性物質(如堿性磷酸酶)包裹在脂質體中,然後將特異性抗體連接到脂質體上。當脂質體上的抗體與特定抗原結合時,脂質體就會破裂並釋放出熒光素,然後測量熒光強度,進而確定抗原的含量。堿性磷酸酶(AP)封裝到免疫脂質體中,酶底物在脂質體外,當免疫脂質體與抗原結合時,脂質體膜的通透性發生變化釋放 AP,AP 與底物反應而顯色、該方法可用於定性或定量分析,操作簡便快捷,已用於紅斑狼瘡、梅毒、乙肝、單核白細胞增多癥等藥物的診斷,如 C 反應蛋白、免疫球蛋白、激素的檢測。免疫球蛋白、激素和其他藥物檢測。

5.脂質體作為DNA載體在基因治療和核酸免疫中的應用

脂質體作為壹種可替代的基因載體,具有無毒、無免疫原性、可生物降解等特點,能保護質粒DNA不被核酸酶降解,並能將目的基因的DNA特異性地遞送到靶細胞中。

納貝爾將HLAB7基因與DC-膽/DOPE陽離子脂質體結合在壹起。五名患者的腫瘤組織中都通過免疫化學方法檢測到了HLAB7蛋白的表達,其中壹名患者在間隔兩次治療後,註射的結節和遠處的結節都出現了消退。將半乳糖苷酶陽離子脂質體註射到荷蘭 ASPC I1 腫瘤裸鼠體內,第三天測定轉染活性,發現腫瘤組織中半乳糖苷酶的表達高於正常組織。目前在美國實施的基因治療方案中,陽離子脂質體介導的基因遞送系統占了12種。

1993年,Robinson等人給小鼠和雞註射了表達血凝素(HA)基因的質粒DNA,這是禽流感病毒(AIV)的壹種保護性抗原,可產生有效的免疫保護反應,抵禦致命的AIV攻擊。Klavinskis 使用單劑量熒光素酶基因與陽離子脂質體(DMRIE/DOPE)復合物鼻腔粘膜接種,4 周後可在血清中檢測到 IgA 和 IgG,而裸 DNA 接種後僅有微量抗體,熒光素酶活性增加了近 30 倍,熒光素酶基因-DNA 脂質體復合物可引起特異性 CTL 反應。Norman等人將13OugCAT報告基因DNA與陽離子脂質體GAP壹DLRIE共軛,質粒DNA脂質體復合物與裸DNA鼻粘膜接種BALB/c小鼠,結果裸DNA接種2d後CAT蛋白表達量為0.02 ng/mg,而脂質體DNA的蛋白表達量為0.02 ng/mg,這表明脂質體DNA的表達量比裸DNA增加了45倍。

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