1.HIV抗體檢測:全血、血清、血漿、口腔粘膜滲出液、尿液和幹血斑樣本。
2.HIV抗原檢測:全血、血清、血漿和病毒培養上清液。
3.t淋巴細胞亞群測定:EDTA或肝素抗凝全血。
4.HIV-1病毒載量、基因型和耐藥性檢測:血漿和濾紙幹血斑(DBS)。
5.HIV核酸的定性定量分析,HIV-1的基因分型和分離培養:淋巴細胞增菌液,外周血單核淋巴細胞(PBMC)和全血。
當然,血液樣本仍然是實驗室最常用的,其他的只是作為補充樣本。
HIV抗體檢測
HIV抗體檢測是艾滋病實驗室檢測的優先項目,也是中國大多數篩查實驗室應用最廣泛的項目。
1.初步篩選方法
酶聯免疫吸附試驗(ELISA)
ELISA是HIV篩查實驗室中最常用、最通用的方法。目前檢測試劑已經發展到第四代,即同時檢測血液中的HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗體,秉承了“誤殺壹千,不如漏網壹個”的革命精神,靈敏度遠遠高於特異性,讓HIV抗體無處藏身。
(2)化學發光或免疫熒光試驗(CIA/IFA)
這種試驗方法是近10年來迅速發展起來的壹種新的檢測方法。它使用發光或熒光底物來檢測抗體、抗原和抗體。發光或熒光儀器測定結果的靈敏度比ELISA進壹步提高,也帶來了檢測成本和假陽性率的增加。
(3)快速檢測法
該方法操作簡單快捷,適用於急診檢測和門診急診檢測,但其靈敏度和特異性遠不及ELISA和發光法,但經濟實惠,有壹定的市場影響力。主要包括以下方法:明膠顆粒凝集試驗(PA)、免疫滲濾試驗和免疫層析試驗。
確認實驗
(1)蛋白質印跡試驗
WB采用間接法檢測樣品中抗HIV-1/HIV-2特異性抗體。用聚丙烯酰胺凝膠電泳分離不同分子量的HIV-1蛋白。經過壹系列處理後,硝酸纖維素膜顯示出與特定抗原結合的抗體條帶,從而證實了抗體的存在。
⑵裏巴/LIA。
實驗原理和WB法基本相同,這裏不再贅述。
HIV-1抗原的檢測
1.篩選實驗
(1)酶聯免疫吸附試驗(ELISA):第四代抗原抗體聯合檢測試劑盒。抗體包被固相反應孔(管)底部,待測樣品中的P24抗原與包被的抗體形成抗原抗體復合物,然後加入酶標(HRP)的HIV-1抗體與抗原結合,加入底物顯色,在酶標儀上讀取結果。由於抗原和抗體同時檢測,靈敏度大大提高,有效縮短了HIV感染的檢測窗口期。但由於試劑成本較高,很難在普通篩查實驗室推廣。
(2)酶聯熒光分析(ELFA):待測樣品的p24抗原與固相孔(管)中包被的p24抗體結合,被生物素標記的p24抗體識別。臨床實驗室應用前景不確定,需要熒光檢測設備,價格昂貴。
(3)電化學發光法(ECLIA):將待測樣品的p24抗原、包被有抗體的磁性顆粒和標記有發光劑的抗體在反應管中孵育,形成磁珠包被的抗體-抗原-標記有發光劑的抗體復合物。
(4)抗原抗體快速檢測:與抗體快速檢測(RT)相同,不同的是攜帶者包被了HIV抗體,檢測靈敏度也較差。
2.中和試驗
中和試驗主要是檢測p24抗原的輔助試驗,也可以做HIV-1RNA的定性或定量檢測,排除初篩試驗的假陽性。
(1)酶聯免疫吸附試驗(ELISA):將待測樣品與中和劑(抗p24抗原的抗體)* * *壹起孵育。如果樣品中存在p24抗原,中和抗體會與其結合形成復合物,但不會與固相載體上的捕獲抗體結合。
(2)酶聯熒光分析法(ELFA):原理和檢測步驟與上述酶聯免疫吸附法(ELISA)相同,中和率≥ 60%,則認為樣品中p24抗原真陽性。
(3)電化學發光法(ECLIA):原理和檢測步驟與上述酶聯免疫吸附法(ELISA)相同,中和率大於50%,則認為樣品中的p24抗原確實為陽性。
HIV核酸檢測
目前國內的HIV核酸檢測試劑主要是Taqman實時熒光PCR檢測試劑,可檢測血漿、血清、組織器官或血液制品中的HIV-1RNA和DNA,DBS可用於檢測RNA/DNA。目前國際上正式用於臨床診斷HIV-1急性感染的核酸檢測試劑很少,主要是美國FDA批準的Gen-Probe公司生產的Aptima HIV-1 RNA核酸定性檢測試劑和歐盟批準的Abbott M2000 HIV-1 RNA/DNA定性檢測試劑。
與臨床診斷相關的檢測策略和結果報告
HIV陽性結果的檢測過程壹般要經歷兩個階段,初篩和復檢程序。以HIV抗體檢測為例,具體流程如下:
試劑1用於初篩,結果無反應,報告“HIV抗體陰性”;如果結果為陽性,則不能出具陽性報告,必須進行復驗。對於初篩有反應的樣本,用雙孔或雙孔中的原試劑對樣本進行復檢(或對兩種試劑進行復檢)。如無反應,報“HIV抗體陰性”;如果有全部反應或壹個反應壹個無反應,將進行補充檢測(抗體確認檢測和HIV-1核酸檢測)報告待確定的HIV感染。