細菌內毒素檢查將處理好的樣品應放置

菌內毒素檢查法作為控制藥品質量的壹種有效方法，已經廣泛的被世界各國藥典收載。經過30多年的不斷改進，無論是凝膠法還是光度法均比較成熟和完善。但是，在為新化合物或新藥建立細菌內毒素檢查方法時，常常會遇到各種各樣的困難，尤其是尚處於新藥研發早期階段的藥物，由於藥物制劑、賦形劑等還不穩定，經常會發生變化，這樣就給方法的建立帶來不同程度的影響。在建立細菌內毒素檢查法之前，應盡可能多的收集有關該藥品的基本信息，例如：有關樣品的溶解性信息，推薦的稀釋液，在水中的溶解度，以及最適溶劑；樣品的pH範圍；分子量大小；產品規格、體積或重量；擬用於臨床的用法和用量等等。以便選擇合適的樣品處理方法和內毒素檢查方法，對於早期研發階段的藥物，應選擇合適的賦形劑，以有利於細菌內毒素檢查中對樣品的稀釋處理。此外，在確定內毒素限值時還應盡可能采用最大人擬用劑量，為臨床安全性和有效性研究中增加劑量留出空間。

壹、細菌內毒素檢查方法建立的主要步驟

對某壹新化合物建立細菌內毒素檢查方法時，首先應根據人體最大日給藥劑量和給藥途徑，計算和確定樣品的內毒素限值，選擇合適的鱟試劑，根據臨床規格，計算最大有效稀釋倍數，稀釋產品，並在低於最大稀釋倍數的濃度下進行檢查。可以采用凝膠法，也可以采用終點法或動態法。當測定結果有爭議時，除另有規定外，以凝膠法為準。

1、細菌內毒素限值的確定

壹個藥品在投放市場前，它是否滿足內毒素限值的要求？樣品的內毒素含量具體是多少？這些問題不但關註用藥安全，還應該最大限度的提供有關內毒素含量的準確信息，為藥品生產過程中質量控制提供警戒信息。盡管細菌內毒素檢查方法的建立是壹個科學方法的研究過程，但其最終目的還是要為控制藥品質量服務。因此，在方法建立時，不但要闡明限值的合理性，考慮技術可能達到的限值，同時還要滿足相關藥品管理法規的要求。

研究人員在建立方法的早期，壹般會按照臨床建議的最大人用劑量確定壹個非正式的限值，這個限值可以根據實驗室可以達到的最低檢測水平，把限值訂的相對比較嚴格，但往往由於早期的臨床劑量會比最終上市的臨床劑量高幾倍，所以嚴格的限值，可能會使得正式生產時很多產品不能通過檢查，從而造成不必要的浪費；因此參按照法規允許的最高水平，酌情確定樣品的限值。

樣品內毒素限值的確定壹般與臨床人體最大給藥劑量有關，劑量越大，單位重量或體積的內毒素限值越低。壹般按以下公式計算：內毒素限值L=K/M。式中內毒素限值L是以EU/ml、EU/mg或EU/u表示；K為按規定的給藥途徑，人體每公斤體重每小時最大可耐受的內毒素劑量，以EU/（kg.h）表示，註射劑K=5EU/（kg.h），其中放射性藥品註射劑K=2.5EU/（kg.h），鞘內用註射劑K=0.2EU/（kg.h）。壹般我國人群平均體重按60kg計算，人體對細菌內毒素的最大耐受量為300EU/h；另我國人體的平均體表面積按1.55m2計算，人體每平方米的最大耐受劑量為(300EU/h)/ 1.55m2 =（193EU/h）/ m2 。 M為人體每公斤體重每小時接受的最大給藥劑量，以ml/（kg.h）、mg/（kg.h）或u/（kg.h）表示。

內毒素限值計算舉例（壹）：A註射劑的人體最大用量為每小時1.5g，每公斤每小時體重的劑量為1.5g/60kg=0.025g/kg=25mg/kg，內毒素限值L=K/M=(5EU/kg)/( 25mg/kg ) = 0.2EU/mg。在細菌內毒素檢查法中，細菌內毒素標準品和鱟試劑常常以EU/ml表示，所以在具體實驗中樣品的內毒素的限量可以轉換為EU/ml的表示方法，可使實驗操作計算更為方便。假定產品A的濃度為100mg/ml（或原料藥經溶解後的濃度為100mg/ml）, 那麽，將產品A的限值從EU/mg轉變為EU/ml時，內毒素限值L= 0.2 EU/mg 100 mg/ml = 20 EU/ml。

內毒素限值計算舉例（二）：B註射劑的臨床最大用藥劑量為1g/m2，規格為50mg/ml，內毒素限值L=（193 EU/ m2）/（1g/m2）=193 EU/g=0.193 EU/mg，轉換為EU/ml 表示時，L = 0.193 EU/mg50 mg/ml=9.65EU/ml

上一篇:復方金錢草顆粒多少錢壹盒？復方金錢草顆粒的功效與作用

下一篇:非常搞笑幽默的文案