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大家是如何測定多糖的

季宇彬.《中藥多糖的化學與藥理》.北京:人民衛生出版社.2005.5多糖含量測定(1)顯色試劑硫酸法:根據單糖、多糖及其衍生物在硫酸作用下水解、脫水生成糖醛類化合物,與酚類、芳胺類等縮合成有色化合物。苯酚硫酸法生成橙黃色溶液,在490nm處有特征吸收;蒽酮硫酸法生成亮綠色溶液,在630nm處有特征吸收;哢哇硫酸法用於測定糠醛酸(伯醇基氧化:形成糠醛酸,斐林(Fehling)試劑可定量。苯酚-硫酸試劑可與遊離的寡糖、多糖中的己糖、糠醛酸起顯色反應,己糖在490nm處(戊糖及糠醛酸在480nm處)有最大吸收,吸收值與糖含量呈線性關系)。顯色試劑硫酸法方便簡單,但需嚴格控制水解條件。(2)DNS法:壹個能消除還原性雜質幹擾的方法(在氫氧化鈉和丙三醇的存在下,還原糖能使DNS還原生成3-氨基-5-硝基水楊酸,在沸水浴中顯色2~5min,此化合物在過量的氫氧化鈉堿性溶液中呈橘紅色,波長在540nm下有最大吸收峰,並且吸光度與還原糖含量有線性關系。試驗過程中諸多因素如吸收光譜、顯色劑用量、顯色時間等均對測定結果有直接影響)。利用3,5-二硝基水楊酸與多糖水解產物還原糖***熱後還原成棕紅色氨基化合物,於540nm處有特征吸收。(主要參考文獻:董文慧,等.雲芝肝泰中雲芝多糖的工業分析方法.中成藥,1990,12(2):33.齊香君,等.3,5-二硝基水楊酸比色法測定溶液中還原糖的研究.纖維素科學與技術.2004,12(3):17~19)(3)滴定法:有斐林氏滴定法,間接碘量滴定法。(4)氣相色譜法:可定性、定量分析多糖的組分及含量,常采用衍生物法以增加其揮發性。壹般是將多糖酸水解物或甲醇解(用鹽酸-甲醇)物,用三甲基矽烷基化(TMS)或三氟乙酰化(TFA)轉化為矽烷化產物或二酰化產物進行氣相色譜分析。但乙酰化之前,糖先用KBO4或NaBH4作還原成開鏈的糖醇化合物較好。多糖用甲醇解方式把半縮醛甲基化,形成甲基糖苷後再TMS化,異構物減少,有利於分辨。常以甘露醇或肌醇為內標,用已知的各種單糖作標準。(5)高效液相色譜法:選用TSK、SW凝膠排斥色譜柱為分離柱,樣品經簡單預處理,在示差折光檢測器中進行檢測,以不同分子量的標準右旋糖酐作標準,同時測定樣品中多糖的分子量分布情況及其含量。換算因子F的測定參見附件還陽參多糖的定性分析及含量測定.pdf|||常見的方法有:GPC測定多糖分子量及其分布瓊脂糖電泳法HPLC方法測定多糖。不同的方法會有些差異。

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