植物組織的蛋白質提取方法:
1.根據樣品重量(1g樣品加入3.5ml提取液,可根據不同材料適當加入),制備提取液,置於冰上。2.將樣品放入研缽中,用液氮研磨。研磨後,將其加入提取物中,並置於冰上(3-4小時)。3.在4℃下以8000 rpm離心40分鐘或在4℃下以11100 rpm離心20分鐘。4.提取上清液,完成樣品制備。
蛋白質提取物:300ml。
1、1 mtris-HCl(PH8)45毫升.2.甘油)75毫升。3.6克聚乙烯吡咯烷酮。該方法針對SDS-PAGE和垂直板電泳。
氯乙酸-丙酮沈澱法制備植物蛋白:
1.在液氮中研磨刀片。2.加入3倍體積的樣品,在-20℃過夜,然後離心(4℃以上8000rpm,4℃下65438±0小時),棄去上清液。3.加入等體積的冰浴丙酮(含0.07%β-巰基乙醇),搖勻,離心(4℃8000rpm以上,4℃65438±0小時),將沈澱物真空幹燥備用。
4.上樣前,加入裂解液,室溫靜置30分鐘,使蛋白充分溶解在裂解液中,然後離心(65438±05℃,8000 rpm,65438±0小時或更長,以無沈澱為準),4℃暫存備用。?
5.用Brandford法對蛋白質進行定量,然後包裝,置於-80℃下備用。藥物:提取物:含65438±00% TCA的丙酮和0.07%β-巰基乙醇。裂解物:將2.7克尿素和0.2克瓊脂溶解在3毫升無菌去離子水中(最終體積為5毫升)。使用前加入1M DTT65ul/ml。
該方法針對雙向電泳的特點,雜質少,離子濃度低。當然單向電泳也適用,但電泳的條帶會減少。