植物細胞組織培養
1.實驗的目的？
植物細胞和組織培養是高度技術性的，需要無菌操作。通過本實驗，掌握常規組織培養技術，加深對無菌操作的理解。？
2.實驗原理？
植物的全能性:植物中的任何壹個細胞都具有生長和分化為壹個完整植株的能力，稱為植物全能性。？
植物組織培養是利用植物全能性在體外培養不育植物的技術。植物組織培養按其本義是指愈傷組織培養。但時至今日，其範圍日益擴大，包括植物及其離體器官、組織、細胞和原生質體的無菌培養。因此，有幾種不同層次的培養技術，即整體、器官、組織、細胞和原生質培養技術。他們的意思是:
1.植物文化。指以完整的植物形態材料(如幼苗和較大的植株)為外植體的無菌培養。
2.？胚胎培養。以從胚珠上分離的成熟或未成熟胚為外植體進行體外無菌培養。
3.？器官文化。是指以根、莖、葉、花、果實等器官為外植體的離體無菌培養，如根尖和切段、莖尖、莖節和切段、葉原基、葉片、葉柄、葉鞘和子葉、花器官的花瓣、雄蕊(花藥、花絲)、胚珠、子房、果實等離體無菌培養。
4.組織培養。無菌體外培養是指從植物的各個部位(如分生組織、形成層、木質部、韌皮部、表皮、皮層、胚乳組織、薄壁組織、髓等)分離出的組織。)或誘導的愈傷組織作為外植體。這是狹義的組織培養。
5.細胞培養。指以單個遊離細胞(如通過尿酸酶從組織中分離出來的體細胞、花粉細胞和卵細胞)為接種物的分離無菌培養物。
6.原生質體培養。體外無菌培養，其中去除細胞壁的原生質體用作外植體。
本試驗以煙草和豌豆為材料。煙草是壹種重要的工業原料，也是植物組織培養中四種典型的實驗植物(煙草、矮牽牛、胡蘿蔔和蕓苔)之壹。它的研究是最廣泛的，總是領先於其他植物材料。目前，在66個煙草品種中，有16有再生植株。通過花藥培養再生花粉植株的有12種，通過原生質體培養再生植株的有20種，通過煙草種內和種間原生質體融合再生雜種的有3種和12種。豌豆(Pisum？Sativum)是豆科植物，是重要的糧食、飼料和蔬菜作物。也是遺傳學家和植物生理學家感興趣並願意采用的實驗植物。豌豆的根、莖、子葉、下胚軸、上胚軸、花蕾等外植體都能形成愈傷組織，其中莖尖、幼胚、幼葉等器官都能成功再生植株。莖尖培養可包括小至十微米的莖尖分生組織(生長點)和大至幾十毫米或更大的莖尖培養。實踐中，常對無病毒病株采用生長點培養，以保存優良品種，提高產量和質量。
3.實驗材料？
儀器設備？
1.酒精燈，100ml三角燒瓶，9 cm培養皿；
2.鑷子、剪刀和解剖針；
3.雙筒解剖顯微鏡；
4.光照培養箱或溫室；
材料和試劑？
1.材質？煙草無菌苗、豌豆苗。
2.試劑
(1)MS培養基，植物激素:NAA、6-BA等。
(2)飽和漂白粉溶液(次氯酸鈉)；
(3)70%酒精、100%酒精和酒精棉球；
(4)無菌水？
4.實驗步驟？
1.煙草無菌苗的快速扡插繁殖——繼代培養:(要求完全無菌操作)？
每組壹瓶煙草無菌苗，請小心操作，以免汙染。？
(1)?在實驗臺上，點亮酒精燈，用酒精棉球擦手消毒，打開裝有無菌煙苗的三角瓶。三角瓶的瓶口在使用前後都需要在酒精燈的外焰上灼燒消毒。？
(2)?用消毒鑷子輕輕擠出1苗，用消毒剪刀將無菌苗剪成0.5-1 cm的小塊，要求每塊至少含有壹個生長點，直接剪成裝有MS培養基的三角瓶。每片必須直接接觸培養基，三角瓶口必須重新消毒，重新封口。？
(3)?在65438±05 ~ 25℃、65438±06小時的光照培養箱中培養4周，即可長出完整植株，可用於大田移栽。？
2.豌豆苗莖尖培養？
⑴?取發芽6天的65，438+00豌豆苗，簡單取65，438+0 cm莖尖，用70%酒精浸泡65，438+0分鐘，再用飽和次氯酸鈉溶液浸泡消毒65，438+05分鐘，用無菌水沖洗5次(此步後要求無菌)，用滅菌濾紙吸水，放入滅菌培養皿中。？
⑵?在雙目解剖鏡下，用已消毒的解剖針剝離幼葉，露出生長錐，用已消毒的解剖針挑取具有兩個或三個葉原基的生長錐。？
⑶?將采摘的莖尖移至MS+10.7 μm ol/L NAA+4.4 μm ol/L？在6-芐基腺嘌呤(6-BA)培養基上誘導愈傷組織形成，並用密封膜密封培養皿。？
【4】在26℃恒溫培養箱中培養六周形成愈傷組織，繼代培養後可用於生根培養。