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中國藥典微生物限度檢查法的檢驗量和供試液制備

檢驗量即壹次試驗所用的供試品量(g、ml或cm?)。

除另有規定外,壹般供試品的檢驗量為10g或10ml;膜劑為100cm?;貴重藥品、微量包裝藥品的檢驗量可以酌減。要求檢查沙門菌的供試品,其檢驗量應增加20g或20ml(其中10g或10ml用於陽性對照試驗)。

檢驗時,應從2個以上最小包裝單位中抽取供試品,膜劑還不得少於4片。

壹般應隨機抽取不少於檢驗用星(兩個以上最小包裝單位)的3倍最供試品。 根據供試品的理化特性與生物學特性,采取適宜的方法制備供試液。供試液制備若需加溫時,應均勻加熱,且溫度不應超過45℃。供試液從制備至加入檢驗用培養基,不得超過1小時。

除另有規定外,常用的供試液制備方法如下。

1.液體供試品

取供試品10ml,加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液至100ml,混勻,作為l:10的供試液。油劑可加入適量的無菌聚山梨酯80使供試品分散均勻。水溶性液體制劑也可用混合的供試品原液作為供試液。

2.固體、半固體或黏稠性供試品

取供試品10g,加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液至100ml,用勻漿儀或其他適宜的方法,混勻,作為1:10的供試液。必要時加適量的無菌聚山梨酯80,並置水浴中適當加溫使供試品分散均勻。

3.需用特殊方法制備供試液的供試品

(1)非水溶性供試品

方法1 取供試品5g(或5ml ),加至含溶化的(溫度不超過45℃)5g司盤80、3g單硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80無菌混合物的燒杯中,用無菌玻棒攪拌成團後,慢慢加人45 ℃的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液至100ml,邊加邊攪拌,使供試品充分乳化,作為1 : 20的供試液。

方法2 取供試品10g,加至含20ml無菌十四烷酸異丙酯(制法見附錄XII A無菌檢查法中供試品的無菌檢查項下)和無菌玻璃珠的適宜容器中.必要時可增加十四烷酸異丙酯的用量,充分振搖,使供試品溶解。然後加入45 ℃的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液100ml,振搖5~10分鐘,萃取,靜置使油水明顯分層,取其水層作為l : 10的供試液。

(2)膜劑供試品

取供試品100cm?,剪碎,加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液100ml(必要時可增加稀釋液),浸泡,振搖,作為1:10的供試液。

(3)腸溶及結腸溶制劑供試品

取供試品10g,加pH6.8無菌磷酸鹽緩沖液(用於腸溶制劑)或pH7.6無菌磷酸鹽緩沖液(用於結腸溶制劑)至100ml,置45 ℃水浴中,振搖,使溶解,作為1 :10的供試液。

(4)氣霧劑、噴霧劑供試品

取規定量供試品,置冰凍室冷凍約1小時,取出,迅速消毒供試品開啟部位,用無菌鋼錐在該部位鉆壹小孔,放至室溫,並輕輕轉動容器,使拋射劑緩緩全部釋出。用無菌註射器吸出全部藥液,加至適量的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液(若含非水溶性成分,加適覺的無菌聚山梨酯80)中,混勻,取相當於10g或10ml的供試品,再稀釋成1:10的供試液。

(5)貼劑供試品

取規定量供試品,去掉貼劑的保護層,放置在無菌玻璃或塑料片上,粘貼面朝上。用適宜的無菌多孔材料(如無菌紗布)覆蓋貼劑的粘貼面,以避免貼劑粘貼在壹起。然後將其置於適宜體積並含有表面活性劑(如聚山梨酯80或卵磷脂)的稀釋劑中,用力振蕩至少30分鐘,制成供試液。貼劑也可采用其他適宜的方法制備成供試液。

(6)具抑菌活性的供試品

當供試品有抑菌活性時,采用下列方法進行處理,以消除供試液的抑菌活性,再依法檢查。常用的方法如下。

①培養基稀釋法取規定量的供試液,至較大量的培養基中,使單位體積內的供試品含量減少,至不含抑菌作用。測定細菌、黴菌及酵母菌的菌數時,取同稀釋級的供試液2ml,每1ml供試液可等量分註多個平皿,傾註瓊脂培養基,混勻,凝固,培養,計數。每1ml供試液所註的平皿中生長的菌落數之和即為1ml的菌落數,計算每1ml供試液的平均菌落數,按平皿法計數規則報告菌數;控制菌檢查時,可加大增菌培養基的用量。

②離心沈澱法取壹定量的供試液,500轉/分鐘離心3分鐘,取全部上清液混合。用於細菌檢查。

③薄膜過濾法見細菌、黴菌及酵母菌計數項下的“薄膜過濾法”。

④中和法凡含汞、砷或防腐劑等具有抑菌作用的供試品,可用適宜的中和劑或滅活劑消除其抑菌成分。中和劑或滅活劑可加在所用的稀釋液或培養基中。

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