用什麽培養基進行雞胚細胞初代培養

I.細胞培養條件和要求 1.所有與細胞接觸的設備、裝置和溶液必須保持絕對無菌，以避免細胞外微生物的汙染。目前最可靠、最常用的滅菌方法是高壓滅菌。例如：玻璃制品、布料、金屬制品：橡膠制品：6.8 kg20min：培養液，如 Hanks 溶液、水解乳蛋白：3.4.5 kg10min.實驗感染物品和動物屍體等：6.8 kg20min.試管、移液管等，可采用幹熱滅菌；所有不適合熱力滅菌的液體，如合成培養液、小動物屍體等。所有不適合加熱滅菌的液體，如合成培養液、小牛血清、胰蛋白酶等，都可以通過過濾進行滅菌。細胞培養常用消毒劑的濃度及其使用方法 2.必須有充足的營養物質供應，絕對不能有有害物質，包括極少量的有害離子混入，為此，我們必須註意設備的清潔和配制液體所用水的質量。水質對細胞培養非常重要（見水處理）。3.確保充足的氧氣供應。細胞新陳代謝需要空氣，否則細胞會死亡。在使用培養罐進行靜態培養或使用旋轉燒瓶進行旋轉培養時，只要培養液的體積不超過總體積的 30%，就可以通過與液體表面的空氣交換確保細胞獲得充足的氧氣供應。當用罐進行深層培養時，則需要通氣，壹般采用含5%CO2的空氣，或根據需要將CO2、N2、O2與空氣按不同比例混合，過多的氧氣也不利於細胞的生長。4.需要隨時清除細胞代謝的有害產物。細胞在代謝過程中會產生大量的代謝廢物，如CO2、乳酸、氨、尿素、吲哚等，這些產物對細胞的生存有害，必須及時清除。少量培養時，培養基中的酚紅指示劑呈黃色，說明產生了大量乳酸，應及時更換新鮮培養基。在大量培養的情況下，要隨時測定葡萄糖和乳酸的含量，調整灌註速度，使代謝物保持在無害水平以下。5.適合其生存的良好外部環境，包括溫度、pH 值、滲透壓和離子濃度等。不同細胞對酸堿度的要求不同。不同細胞對pH值的要求不同，壹般來說，適合細胞生長的pH值在6.7.4左右，過高或過低都不利於細胞生長。如上所述，細胞在新陳代謝過程中會產生大量乳酸，從而降低培養液的 pH 值。為了維持培養液的 pH 值，通常會在培養液中加入各種緩沖體系，如 Na2HPO4/Na2HPO4、NaHCO3/H2CO3（CO2）、三尖杉堿（Tricineglycine），以及加入緩沖液 Hepes's solution（常用濃度為 10-50 mol/L）。6.及時播種，保持適當的細胞密度（見細胞傳代）二、細胞分離 1. 人白細胞的分離。人白細胞是制備 IFN-α 和 γ 的常用細胞，主要來自獻血者的靜脈血，也可來自手術中殘留在體外循環中的血液、分娩時的臍帶血以及脾臟、扁桃體等組織。2.分離人類胚胎心肌細胞。用於制備 IFN-β。III.體外培養細胞年齡的計算二倍體細胞年齡的計算方法是細胞群體的倍增，以每個培養容器細胞群體的細胞數為基礎，每翻壹番為壹代，即 1 瓶細胞對 2 瓶（播種率 1:2），再生長滿壹瓶為壹代；1 瓶細胞對 4 瓶（1:4）為第二代；1 瓶細胞對 8 瓶（1:8）為第三代。用於生產的細胞年齡僅限於細胞壽命的前 2/3。傳代細胞系按壹定稀釋度進行傳代，每傳代壹次視為壹代。最終用於生產的細胞代數限制是根據每個細胞系的經驗數據確定的，以確保細胞的質量和安全。IV.細胞鑒定測試新建立的細胞系或品系、細胞庫和生產結束時的細胞應進行鑒定測試，以確認其為原始細胞。可采用遺傳特征、DNA 指紋、染色體標記、免疫學、HLA 和生化（如同工酶）檢測等方法。也可使用更簡單、更具鑒別性的方法，但必須獲得國家藥物管制研究所（NIDC）的批準。人類二倍體細胞系來源於正常人的胎兒肺部或其他組織，主要用於培養病毒和制備疫苗。1.對細胞株的要求人類二倍體細胞株必須按照以下要求進行全面鑒定。(1) 建立細胞系必須具備以下信息。用於建立細胞系的胎兒的胎齡和性別，以及終止妊娠的原因。用於建立細胞系的胎兒父母的年齡、職業和健康狀況（由醫生證明），以及胎兒父系和母系三代中無明顯遺傳缺陷的歷史。取出胎兒組織前應進行詳細調查。原代組織的類型、原代細胞培養的細胞數量及其生長情況。細胞培養的方法、歷史、生長特點和壽命代數。細胞生長液的成分。