牛肉膏 3g
蛋白腖 10g
NaCl 5g
瓊脂 15—20g
水 1000ml
pH 7．4—7．6
三、器材
牛肉膏，蛋白腖， NaCl，瓊脂；
1mol/L NaOH， 1mol/L HCl；
試管，三角燒瓶，燒杯，量筒，玻棒，培養基分裝器，扭力天平，牛角匙，高壓蒸汽滅菌鍋，pH試紙（ pH 5．5—9．0），棉花，牛皮紙，記號筆，麻繩，紗布等。
四、操作步驟
1．稱量
按培養基配方比例依次準確地稱取牛肉膏、蛋白腖、NaCl放入燒杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶化後倒入燒杯。也可放在稱量紙上，稱量後直接放入水中，這時如稍微加熱，牛肉膏便會與稱量紙分離，然後立即取出紙片。蛋白腖很易吸潮，在稱取時動作要迅速。另外，稱藥品時嚴防藥品混雜，壹把牛角匙用於壹種藥品，或稱取壹種藥品後，洗凈、擦幹，再稱取另壹藥品，瓶蓋也不要蓋錯。
2．溶化
在上述燒杯中可先加入少於所需要的水量，用玻棒攪勻，然後，在石棉網上加熱使其溶解。待藥品完全溶解後，補充水分到所需的總體積。如果配制固體培養基，將稱好的瓊脂放入已溶化的藥品中，再加熱溶化，在瓊脂溶化的過程中，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底使燒杯破裂。最後補足所失的水分。
3．調pH
在未調pH前，先用精密pH試紙測量培養基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培養基中逐滴加入1mol/L NaOH，邊加邊攪拌，並隨時用pH試紙測其pH值，直至pH達7．6。反之，則用1mol/L HCl進行調節。註意pH值不要調過頭，以避免回調，否則，將會影響培養基內各離子的濃度。
對於有些要求pH值較精確的微生物，其pH的調節可用酸度計進行（使用方法，可參考有關說明書）。
4．過濾
趁熱用濾紙或多層紗布過濾，以利結果的觀察。壹般無特殊要求的情況下，這壹步可以省去（本實驗無需過濾）。
5．分裝
按實驗要求，可將配制的培養基分裝入試管內或三角燒瓶內。分裝裝置見圖Ⅴ-1。
分裝過程中註意不要使培養基沾在管口或瓶口上，以免沾汙棉塞而引起汙染。
(1)液體分裝分裝高度以試管高度的1/4左右為宜。
(2)固體分裝分裝試管，其裝量不超過管高的1/5，滅菌後制成斜面，如圖Ⅴ-2。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的壹半為宜。
(3)半固體分裝試管壹般以試管高度的1/3為宜，滅菌後垂直待凝。
6．加塞
培養基分裝完畢後，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物進入培養基內而造成汙染，並保證有良好的通氣性能（棉塞制作方法附本實驗後面）。
7．包紮
加塞後，將全部試管用麻繩捆紮好，再在棉塞外包壹層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用壹道麻繩紮好。用記號筆註明培養基名稱、組別、日期。三角燒瓶加塞後，外包牛皮紙，用麻繩以活結形式紮好，使用時容易解開，同樣用記號筆註明培養基名稱、組別、日期。
8．滅菌
將上述培養基以1．05kg/cm2（15磅/英寸2），121．3℃， 20分鐘高壓蒸汽滅菌。如因特殊情況不能及時滅菌，則應放入冰箱內暫存。
9．擱置斜面
將滅菌的試管培養基冷至50℃左右，將試管棉塞端擱在玻棒上，擱置的斜面長度以不超過試管總長的壹半為宜。
10．無菌檢查
將滅菌的培養基放入37℃的溫室中培養24—48小時，以檢查滅菌是否徹底。
附：棉塞的制作
棉塞的作用有二：壹是防止雜菌汙染；二是保證通氣良好。因此，棉塞質量的優劣對實驗的結果有很大的影響。正確的棉塞要求形狀、大小、松緊與試管口（或三角燒瓶口）完全適合，過緊則防礙空氣流通，操作不便；過松則達不到濾菌的目的。加塞時，應使棉塞長度的1/3在試管口外，2/3在試管口內，如圖Ⅴ-3。棉塞的制作過程如圖Ⅴ-4。
此外，在微生物實驗和科研中，常要用通氣塞。所謂通氣塞，就是幾層紗布（壹般為8層）相互重疊而成，或是在兩層紗布間均勻鋪壹層棉花而成。這種通氣塞通常加在裝有液體培養基的三角燒瓶口上。經接種後，放在搖床上進行振蕩培養，以獲得良好通氣促使菌體的生長或發酵。通氣塞的形狀