江蘇新沂市康原食用菌研究所 TEL:0516-88939450
(壹)母種的制備 用試管制成斜面培養基，並接種原始試管種(保留種，並用於生產的母種)即為生產母種，可用於擴接原種。
1． 培養基配方
配方壹 馬鈴薯培養基（PDA）馬鈴薯200克 蔗糖20克 瓊脂20克 水1000毫升
配方二 綜合馬鈴薯培養基 馬鈴薯 200克 葡萄糖20克 磷酸氫二鉀3克 硫酸鎂1.5克 維生素B1 10毫克 瓊脂20克 水1000毫升 PH值自然
配方三 合成培養基 馬鈴薯 20克 葡萄糖20克 磷酸二氫鉀2克 蛋白腖5克
酵母膏5克 硫酸鎂1克 水1000毫升 PH值自然
2．培養基制作方法 先將馬鈴薯洗凈去皮（挖去芽眼） 切成簿片，稱取200克，加水1000毫升，煮沸15—20分鐘，用4層紗布過濾，取其濾液補足水至1000毫升，加入瓊脂20克，再加熱，瓊脂溶化後，再加入其它藥品。 培養基的分裝，應在培養基凝固前進行（瓊脂培養基40℃凝固）壹般用漏鬥，或分裝瓶，下端連接壹段軟橡皮管，橡皮管下面再連接壹段玻璃管，在橡皮管上安裝壹個止水彈簧夾，分裝時將玻璃管插入試管內，但不要碰到管壁，裝入量為試管長度1/4。裝好後塞上棉塞，用線繩捆紮起來，棉塞部分用報紙包紮。
3．滅菌 將試管直立放入高壓蒸氣滅菌鍋，在0.11MPa/C㎡壓力下(鍋入溫度達121℃)滅菌30-35分鐘,使微生物包括芽孢全部殺死。待壓力降到0時，慢慢放出鍋內氣體，趁培養基沒有凝固時，將試管擺成斜面。
4．接種、培養 通過無菌操作方法將菌種接入試管斜面上，置28℃、3天後將溫度降至24℃繼續培養，7—15天左右，菌絲長滿整個試管斜面，即成(生產)母種。
(二)原種、制備 母種接種到原種培養基上，進行擴大繁殖育種即為原種，原種壹般采用廣口瓶或袋裝。
1．培養基配方 配方壹 木屑麩皮培養基 闊樹木 78% 麩皮 20% 糖 1% 石膏粉 1%
配方二 棉籽殼木屑培養基 棉籽殼 80% 木屑15% 糖 1% 麩皮 5% 過磷酸鈣 3% 石膏粉 1%
2．拌料與裝袋 選用新鮮無黴變原料，充分混勻，加水比例為1：1.3左右拌勻，總含水量60%-63%。含水量以手緊握培養料指縫間有水欲滴為宜。堆悶30分鐘後，裝瓶(袋)。用機械或人工裝袋稍加壓實，袋口用無棉蓋體封口。
3．滅菌 滅菌方法有兩種，高壓滅菌和常壓滅菌。高壓滅菌又稱加壓蒸氣滅菌，滅菌原理：在高溫(121℃以上)、高壓(0.11MPa/C㎡)條件下滅菌2小時，將芽孢在內的微生物全部殺死。常壓滅菌稱流通蒸氣滅菌，由於滅菌設備、條件和基本因素的不同，溫度變動在95-105℃之間，其熱力、穿透力不強，在壹定溫度下要維持足夠時間才能達到滅菌目的，通常在100℃下維持10-12小時。
4．接種與培養 不論用接種箱或接種室接種，在接種前，需對接種箱或接種室用0.2%的來蘇水或漂白粉進行消毒處理，然後將滅菌過的料瓶(袋)放在箱內，用煙霧劑密閉薰蒸消毒。接種室消毒，壹間房需點燃3盒50克規格煙霧劑；接種箱消毒每次用4克，壹支母種試管可接4—6瓶(袋)原種。將接種後的菌種瓶(袋)放入發菌室黑暗處培養。培養室溫度22-26℃，相對濕度70%以下，發菌期間應保持良好的通風條件。原種從接種到菌絲長滿瓶(袋)需30—40天。
(三)栽培種制備 原種進壹步擴繁，即為栽培種。栽培種壹般采用塑料袋制備，用無棉蓋體封口。壹瓶原種可接50-60瓶(袋)栽培種。栽培種培養基配方及拌料、裝袋、滅菌、接種、發菌管理與原種相同。