GC-MS法測定動物食品中的三聚氰胺
Spectra-Quad實現三聚氰胺含量在線檢測
超高效液相色譜_電噴霧串聯質譜法測定飼料中殘留的三聚氰胺
反相高效液相色譜法測定飼料中三聚氰胺的含量
高效液相色譜-二極管陣列法測定高蛋白食品中的三聚氰胺
高效液相色譜法(HPLC)測定飼料中三聚氰胺的含量
高效液相色譜-四極桿質譜聯用測定飼料中三聚氰胺含量
固相萃取與高效液相色譜聯用測定寵物食品中三聚氰胺
液相色譜串聯質譜法(LC-MSMS）分析寵物食品中三聚氰胺
液相色譜-串聯質譜法測定飼料中三聚氰胺殘留
GC-MS法測定動物食品中的三聚氰胺
2.1儀器與條件
Agilent1100高效液相色譜儀（美國，Agilent公司）；二極管陣列檢測器（DAD），檢測波長240nm，柱溫：40℃。
（1）AgelaVenusilTMASBC18（4.6×250mm）；緩沖液：10mM檸檬酸,10mM庚烷磺酸鈉；流動相：緩沖溶液:乙腈=85:15；流速：1.0mL/min。
（2）AgelaVenusilTMASBC8（4.6×250mm）；流動相：緩沖液：乙腈=85：15；緩沖液：10mM檸檬酸，10mM辛烷磺酸鈉，調pH為3.0；流速：1.0mL/min；
離子交換固相萃取柱AgelaClearnertTMPCX(北京艾傑爾科技有限公司)
2.2試劑與樣品
寵物飼料樣品（農業部飼料供應中心提供）；甲醇、乙腈為北京艾傑爾科技有限公司提供；氨水、乙酸鉛、三氯乙酸、均購於北京化學試劑公司；三聚氰胺標準品、檸檬酸、辛烷磺酸鈉（Sigma公司）；甲醇為色譜純，其他均為化學純。
3實驗方法
3.1樣品前處理方法
(1)標準樣品配制：
取50mg三聚氰胺標準品，以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的標準溶液，使用時，以提取液(0.1%三氯乙酸)稀釋至所要的濃度。
(2)提取：
稱取飼料樣品5g，加入50ml0.1%三氯乙酸提取液，充分混勻，加入2mL2%乙酸鉛溶液，超聲20min。然後取部分溶液轉移至10mL離心管中，8000rpm/min離心10min，取上清液3mL過混合型陽離子交換小柱(PCX)。
(3)凈化(PCX小柱，60mg/3mL)：
a)活化及平衡：3mL甲醇，3mL水
b)上樣：加入提取液3mL
c)淋洗：3mL水；3mL甲醇；棄去淋洗液並將小柱抽幹。
d)洗脫：5mL5%氨化甲醇(v/v)洗脫。(5%氨化甲醇的配制：5mL氨水+95mL甲醇)。
e)濃縮：50℃，氮氣吹幹，20%甲醇/水定容至2mL，HPLC分析或衍生後GC/MS分析。
3.2HPLC檢測方法
3.2.1三聚氰胺HPLC-UV檢測方法
三聚氰胺是強極性化合物，在傳統的反相C18柱上保留很差，需要用離子對試劑色譜方法才能有良好的保留與分離，按照美國食品藥品監督管理局（FDA）的三聚氰胺檢測方法和中國農業部公布的三聚氰胺檢測方法，采用艾傑爾(Agela)ASB系列親水色譜柱，可以得到良好的分離效果，分析色譜圖如下：
圖2VenusilASB色譜柱分離三聚氰胺的譜圖
(a)色譜柱：VenusilASBC84.6×250mm；標準：FDA方法；流動相：緩沖液：乙腈=85：15；緩沖液：10mM檸檬酸，10mM辛烷磺酸鈉，調pH為3.0；流速：1.0mL/min；柱溫：40oC；波長：240nm
(b)色譜柱：VenusilASB-C184.6×250mm；標準：中國農業部頒標準方法；緩沖液：10mM檸檬酸,10mM庚烷磺酸鈉；流動相：緩沖溶液:乙腈=85:15；流速：1.0mL/min;柱溫：40℃；波長：240nm
空白加水平（mg/L）回收率0.01116%0.1108%0.592%296%
3.2.2三聚氰胺LC-MS檢測方法
由於FDA公布的HPLC-UV方法中，流動相添加了離子對試劑，因此限制了液質聯用方法的使用；但不用離子對試劑色譜方法，三聚氰胺在傳統的C18柱上保留很差，不能得到較好的分離定量〔3〕。
基於此問題，艾傑爾科技公司自主開發了新的方法，采用艾傑爾(Agela)ASB系列親水色譜柱，不用離子對試劑也能得到有效的保留與分離。因此方法中流動相不含離子對試劑，可以用於質譜檢測。
與FDA2007年4月公布的《UpdatedFCCDevelopmentalMelamineQuantitation(HPLC-UV)》相比較，該方法大大降低了最低檢測限（MSD：0.5ppm；UV：2ppm），提高了檢測靈敏度。
以該方法分別在ASB-C84.6×250mmASB-C184.6×250mm得到的譜圖如下：
圖3LC-MS方法檢測三聚氰胺的譜圖
緩沖液：10mM的NH4AC；
流動相：Buffer:：ACN=95：5；流速：1.0mL/min；進樣量：樣品先用70%ACN溶解成約1mg/mL，用ACN稀釋成0.1mg/mL，進10uL；柱溫：40℃；波長：240nm
4結果與討論
4.1陽離子交換柱(PCX)
三聚氰胺呈弱堿性(弱陽離子化合物)，凈化過程壹般應選擇陽離子交換柱。混合型的陽離子交換柱(PCX)通過將磺酸基團(-SO3H)鍵合在極性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯（PEP）吸附劑上，具有陽離子交換和反相吸附兩種機理，並具有以下優點：
a)可通過兩種不同溶液的洗滌(水/壹定pH值的緩沖溶液和有機溶劑)，使樣品更幹凈，提高檢測的靈敏度。
b)批次重復性好。
c)回收率高，重現性好，即使小柱跑幹也可以得到較高回收率。
4.2LC-MS方法優點：
（1）檢測過程簡便：無須添加離子對試劑，三聚氰胺就可得到良好的保留與分離，避免了配制離子對流動相的復雜過程。
（2）提高了檢測的靈敏度：無離子對試劑，可以用於質譜檢測器，大大降低了最低檢測限（MSD：0.5ppm；UV：2ppm）。
（3）降低了檢測成本：不用離子對試劑，就不再需要買價格較貴的離子對試劑了，從而降低了檢測成本。
（4）延長了色譜柱的使用壽命：避免了使用離子對試劑減少色譜柱壽命的影響。
（5）該方法所使用的色譜柱具有通用性：無論是用FDA方法、中國農業部部頒標準方法和本公司開發的LC-MS方法，使用艾傑爾(Agela)ASB系列親水色譜柱均能得到壹個很好的檢測結果，從而給客戶提供了多種選擇空間。
國家食品質量監督檢測中心有關人士說，在現有的國家標準奶粉檢測中，主要進行蛋白質、脂肪、細菌等檢測。三聚氰胺屬於化工原料，是不允許添加到食品中的，所以現有標準不會包含相應內容。也就是說，三聚氰胺不屬於常規檢測項目，正常情況下，很少有人會想到去檢測它。
參考資料：