PCR室的汙染監測與預防
2012全國司法與血液中心國際標準DNA實驗室觀摩會議將於明年6月在青島國際會展中心舉行。本次觀摩會以打造世界級展會為理念，展示符合國際標準的世界級DNA實驗室樣板間。實驗室解決方案將在展覽期間免費分發給與會者。本文是組委會前幾天提出的系列解決方案的壹部分。
PCR反應最大的魅力在於其擴增能力和高靈敏度，但易汙染壹直是困擾實驗室的壹大難題。極少量的汙染就可能引起假陽性反應，破壞檢測結果。如何監測和預防PCR汙染是目前實驗室的壹個重要課題。
壹.汙染監測
壹個好的PCR實驗室必須時刻關註汙染的監測，考慮是否被汙染，如果被汙染，為什麽被汙染。通過有效的監控，采取正確的相應措施，防止或消除汙染。
控制試驗是監控PCR汙染的重要手段。
1，陰性對照:每個PCR實驗都需要陰性對照。包括標本質控和試劑質控，通過標本質控和試劑質控確認樣本和試劑是否被感染。
2.陽性對照:是PCR反應是否成功，產物條帶的位置和大小是否符合理論要求的重要參考標誌。對於陽性對照，應選擇擴增適度且重復性好的樣品，並確定為產品。但是，陽性對照可能會汙染被檢測或擴增的樣品。因此，當壹種PCR試劑已經穩定使用，檢驗人員已經完全掌握時，在後續的實驗中應盡可能避免陽性對照。減少汙染的可能性。
3.從不同區域選擇引物進行PCR擴增。
4.重復性測試。
第二，防止汙染的方法
1.實驗室的合理分隔:將樣品處理、PCR反應液的制備、PCR循環擴增和PCR產物的鑒定等步驟劃分為區或室，特別是將樣品處理和PCR產物的鑒定與其他步驟嚴格分開。理想的分區是樣品處理區、PCR反應液制備區、PCR循環擴增區和PCR產物鑒定區。
2.PCR試劑要預混包裝:所有PCR試劑都要小批量包裝，PCR反應液盡量提前配好，然後小批量包裝，保存在-20℃，減少重復加樣的次數，避免汙染的機會。此外，PCR試劑和PCR反應液應與樣本和PCR產物分開存放，不要放在同壹個冰盒或冰箱中。
3.吸樣槍汙染防護:吸樣槍是壹種非常容易被汙染的設備。如果樣品或模板核酸在操作過程中不慎被吸進槍內或粘在槍頭上，就會成為嚴重的汙染源。所以在使用吸樣槍時，要格外小心，慢慢吸樣，盡量壹次性完成，避免多次吸樣，以免交叉汙染或氣溶膠汙染。
4.減少PCR循環次數:PCR產物達到檢測水平為宜。
5、防止被操作者汙染:使用壹次性手套、吸頭、小離心管。