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肝素是如何提取和制造的?

I.酶法-樹脂法 酶法

取新鮮腸粘膜 100kg(總固形物 5%-7%),加苯酚 200ml

(0.2%),如溫度低可不加。攪拌下加入0.5-1kg(0.5%-1%)胰臟碎粒。

300-400g/L(30%-40%)NaOH溶液調節pH8.5-9,加熱至40-45℃,保溫2-3h。pH8時,再加入5kg粗鹽(5%)加熱至90℃左右,用6mol/L

鹽酸調節pH為6.5左右,停止攪拌,保溫 濾液用布袋過濾20min,得消化濾液。

二、鹽析-樹脂法

提取

取新鮮豬腸粘膜放入反應鍋中,按30g/L(3%)加入氯化鈉、NaOH調pH9,逐漸升溫至50-55℃。保溫 2h,繼續升溫至 95℃,維持 10min,冷卻至 50℃以下,用 30 目雙層紗布過濾,收集濾液。

豬腸粘膜[NaCl;;NaOH]→[pH9;50-55℃]濾液吸附、洗滌、洗脫、沈澱

取冷卻至50℃以下的濾液,加入714型(強堿性)Cl型樹脂(新樹脂用量為2%),攪拌8h,靜置過夜。

三、CTAB*提取法

(*十六烷基三甲基溴化銨為長鏈季銨鹽)提取、絡合

豬腸粘膜液按豬腸粘膜液(V):Na2SO4(m):硫酸鋁(m):CTAB(V)=1:0.15:0.04:0.001的比例配成原料。

取新鮮豬小腸粘膜放入反應罐中,在攪拌下加入硫酸鈉,溶解,用堿調節pH11-11.5,升溫至50℃,保溫攪拌2h。加入硫酸鋁,溶解,用氫氧化鈉調節 pH7.5-8,升溫至 95℃,保溫 10 分鐘。

擴展資料:

肝素的檢測:

1、APTT

APTT仍是監測UFH的選擇之壹。它是壹種非常簡單、快速和廉價的程序。APTT 檢測要求整個凝血瀑布中的所有蛋白質都完好無損,這樣才能準確測量肝素水平。

2.硫酸魚精蛋白中和試驗

該試驗的原理是,帶高負電荷的 UFH 分子會被帶正電荷的硫酸魚精蛋白中和。在血漿中加入不同濃度的硫酸魚精蛋白,然後加入凝血酶,測定凝血時間。能使凝血酶原凝結時間恢復正常的硫酸魚精蛋白濃度即為肝素濃度。

3、抗 Xa 活性檢測

顯色底物法檢測肝素抗 Xa 活性的原理相同:標本中的肝素與 AT 形成復合物,抑制過量添加的 Xa 因子。剩余的 Xa 因子活性通過其與釋放 pNA 的特定底物的相互作用來測定。

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