2.分離培養和鑒定：血液應接種膽汗肉湯以增加細菌；糞便和離心尿沈渣可直接接種腸桿菌科選擇性培養基。37 ℃培養 18～24 小時後，選擇無色半透明菌落的不發酵乳糖塗片，染色、鏡檢後接種含二糖鐵或三糖鐵培養基。懷疑有沙門氏菌時，可進行生化反應和玻片凝集試驗進行鑒定。
可溶性抗原，協助腸熱病的早期臨床診斷。常用化肥（威達）反應。即用已知的傷寒O、H抗原和A、B副傷寒H抗原與待檢血液作定量凝集試驗。根據抗體含量的多少及其生長情況，輔助腸傷寒的臨床診斷。
腸炎多由傷寒桿菌和副傷寒甲、乙型桿菌引起，因此通常采用這三種細菌的抗原進行檢測。在某些地區，它也可能由副傷寒桿菌 C 引起，因此檢測時應加入副傷寒桿菌 C H 的抗原。
腸道熱患者在第壹周結束時檢測結果可能呈陽性。確定結果時必須考慮以下幾點。
1.抗體水平正常：正常人由於隱性感染或接種疫苗，血清中可含有壹定量的抗體，其效價隨各地情況而異。壹般來說，O 型凝集值≥1:80，H 型凝集值≥1:160 具有診斷價值。
2.動態觀察：化驗反應結果應與臨床癥狀和病期相結合。壹次凝集效價增高，有時不能下定論。如間隔數日重復出現，若作用時間延長，病程逐漸延長，且增加4倍以上，則有診斷意義。
3.O、H抗體在診斷中的意義：患腸熱後，體內O、H抗體不同。lgM型O抗體出現較早，持續時間僅半年左右，傷寒以外的細菌消失後，副傷寒細菌不易受非特異性抗原刺激而再出現。lgG 型 H 抗體出現較晚，維持時間可長達數年，細菌消失後易受非特異性抗原刺激而短暫再現。而 lgG 型 H 抗體出現較晚，維持時間可長達數年。因此，①若H、O凝集效價均超過正常，感染傷寒、副傷寒的可能性大；②H、O效價均低，感染腸熱的可能性很小；如 H 效價高而 O 效價不高，可能是預防性接種或非特異性召回；④如 O 效價高而 H 效價不高，可能是早期感染或其他沙門氏菌感染（S. Enteritidis 和 S. Tymonella）。Enteritidis 和 S. Typhimurium 具有相同的 ****O 抗原）引起的交叉反應。
4.其他：少數病例在整個病程中肥城試驗仍為陰性。可能是：①發病初期使用大量抗生素或多種抗生素治療；②患者免疫力低下。因此，當檢測結果為陰性時，不宜急於否定診斷。
傷寒不同階段血、糞、尿中病原菌及特異性凝集素的陽性檢出率 最可靠的方法是分離培養病原菌，但檢出率不高。壹般可先檢測可疑血清中有無Vi抗體，當效價為>1:10時，再取糞便或尿液進行多次分離培養，才能確定。