第壹部分：操作前準備
試劑準備
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DGGE 操作步驟
1. 將海綿墊固定在制膠架上，把類似‘三明治’結構的制膠板系統垂直放在海綿上方，用
分布在制膠架兩側的偏心輪固定好制膠板系統，註意壹定是短玻璃的壹面正對著自己。
2. ***有三根聚乙烯細管，其中兩根較長的為15.5cm，短的那根長9cm。將短的那根與Y
形管相連，兩根長的則與小套管相連，並連在30ml 的註射器上。
3. 在兩個註射器上分別標記‘高濃度’與‘低濃度’，並安裝上相關的配件，調整梯度傳
送系統的刻度到適當的位置!
4. 反時針方向旋轉凸輪到起始位置。為設置理想的傳送體積，旋松體積調整旋紐。將體積
設置顯示裝置固定在註射器上並調整到目標體積設置，旋緊體積調整旋紐。例如
16*16cm gels(1mm thick)：設體積調整裝置到14.5。
5. 配制兩種變性濃度的丙烯酰胺溶液到兩個離心管中。
6. 每管加入18 μl TEMED，80 μl 10%APS，迅速蓋上並旋緊帽後上下顛倒數次混勻。用連
有聚乙烯管標有‘高濃度’的註射器吸取所有高濃度的膠，對於低濃度的膠操作同上。
7. 通過推動註射器推動桿小心趕走氣泡並輕柔地晃動註射器，推動溶液到聚丙烯管的末
端。註意不要將膠液推出管外，因為這樣會造成溶液的損失，導致最後凝膠體積不夠。
8. 分別將高濃度、低濃度註射器放在梯度傳送系統的正確壹側固定好，註意這裏壹定要把
位置放正確! 再將註射器的聚丙烯管同Y 形管相連。
9. 輕柔並穩定地旋轉凸輪來傳送溶液，在這個步驟中最關鍵的是要保持恒定勻速且緩慢地
10. 小心插入梳子，讓凝膠聚合大約壹個小時。並把電泳控制裝置打開，預熱電泳緩沖液到
60℃。
11. 迅速清洗用完的設備。
12. 聚合完畢後拔走梳子，將膠放入到電泳槽內，清洗點樣孔，蓋上溫度控制裝置使溫度上
升到60℃。
13. 用註射針點樣。
14. 電泳（200V，5h）。
15. 電泳完畢後，先撥開壹塊玻璃板，然後將膠放入盤中。用去離子水沖洗，使膠和玻璃板
脫離。
16. 倒掉去離子水，加入 250 ml 固定液（10% 乙醇, 0.5% 冰醋酸）中，放置 15min。
17. 倒掉固定液，用去離子水沖洗兩次，倒掉後加入 250 ml 銀染液（0.2% AgNO3, 用之前加
入 200μl 甲醛）中，放置在搖床上搖蕩，染色 15min。
18. 倒掉銀染液，用去離子水沖洗兩次，倒掉後加入 250 ml 顯色液（1.5% NaOH, 0.5% 甲
醛）顯色。
19. 待條帶出現後拍照。
貌似藥品配制不顯示，妳把郵箱給我，我給妳發~