藥物:培養基(RPMI1640或DMEM)，小牛血清或胎牛血清，0.25%胰蛋白酶，漢克氏溶液。
儀器:CO？培養箱，倒置顯微鏡，超凈臺。1.無菌室前用肥皂洗手，用75%酒精擦手消毒。
2.倒置顯微鏡下觀察細胞形態，確定細胞是否需要傳代以及細胞稀釋倍數。將培養液在37℃預熱。
3.超凈臺臺面要整潔，用0.1%新潔爾滅溶液清洗。
4.打開超凈臺紫外線燈照射臺面約20min，關閉超凈臺紫外線燈，打開排氣扇凈化空氣，去除臭氧。
5.點亮酒精燈；取出無菌試管、巴斯德移液管和校準移液管；安裝橡膠頭；酒精燈火焰輕微燃燒後，插入無菌試管。
6.將培養液的瓶口用75%的酒精消毒，通過酒精燈的火焰後放在酒精燈旁邊的架子上。
7.傾倒用於培養細胞的舊培養基。視情況，可用2-3 ml hanks液洗去殘留的舊培養基，或用少量胰蛋白酶沖洗。
8.每個大培養瓶中加入1mL胰蛋白酶，小瓶裝酌情減少用量。瓶蓋合上後，在倒置顯微鏡下觀察。當細胞變圓時，立即翻轉培養瓶，使細胞擺脫胰蛋白酶，然後倒掉胰蛋白酶。註意不要讓細胞過早脫落到消化液中。
9.加入少量含血清的新鮮培養基，反復吹氣使消化後的細胞脫落分散，然後根據轉瓶數加入壹定量含血清的新鮮培養基(7 ~ 10ml/瓶，3 ~ 5ml/瓶)制成細胞懸液，再分裝到新的培養瓶中。蓋上瓶蓋，適度擰緊，然後輕輕轉動，以方便CO？氣體進入後，將培養瓶放回CO？孵化器。
10.對於懸浮培養的細胞，不需要步驟7-9。可將細胞懸液離心除去舊培養基的上清液，並可加入新鮮培養基，然後裝入瓶中。
需要註意的事項
1.註意無菌操作，防止傳代過程中細胞間的交叉汙染。所有操作都應盡可能靠近酒精燈的火焰。最好壹次只執行壹個單元操作。每個牢房使用壹套設備。培養液應嚴格分開。
2.每天觀察細胞形態，掌握細胞是否健康的標準:健康的細胞形態飽滿，折光性好，生長密集時可以傳下去。
3.如果發現細胞被汙染，應立即采取措施。壹般來說，被汙染的細胞應該丟棄。如有必要保存，可加入含抗生素的BSS或培養基反復清洗，然後在培養基中加入大量抗生素，並經常更換培養基。