首先,應變:
大腸桿菌(EscherichiacoliATCC8099)
二、試劑和儀器
蛋白腖
濃縮牛肉汁
氯化鈉
Cary100紫外-可見分光光度計
第三,培養基
營養細菌培養基NB。
蛋白腖5g,牛肉膏粉3g,蒸餾水1000ml,pH 6.8±0.2。
營養瓊脂培養基。
蛋白腖5g,牛肉膏粉3g,瓊脂粉15g,蒸餾水1000ml,pH 6.8±0.2。
1和對數生長期菌液的制備
取規定保存世代內的試驗菌株,在火焰旁挑壹個白金圈,在營養瓊脂培養基上劃線,37℃65438±0℃培養24小時後,挑平板上壹個完整的單菌落,放入20mL營養菌培養基中,搖勻(110r/min,振幅3cm)24小時。
2.穩定期菌液的制備
取培養好的對數生長菌液0.4mL,置於20mL營養菌培養基中,然後振蕩培養4小時,即為穩定生長菌液。
四、吸光度的測定(ABS值)
取穩定期的培養菌液,按設定的不同稀釋倍數(5,10,20,40倍)依次稀釋(稀釋液為1/20NB),在標準波長660nm處測定壹組不同濃度菌液的吸光度。(測試前使用空白1/20NB調零)。
五、活菌計數
在無菌室裏靠火焰操作。依次測定四個不同稀釋倍數的菌落數。對於每個稀釋倍數,依次建立幾個濃度梯度,用無菌吸管吸取1mL,註入平板。在45 ~ 50℃註入約15 ml營養瓊脂培養基,然後旋轉培養皿,使樣品和培養基充分混合均勻。待培養基凝固後,將培養皿翻轉,置於37℃65438±0℃培養箱中培養24小時,然後進行菌落計數。肉眼觀察,計數菌落數,記下每個平板的菌落數。
計算相同稀釋度下每個平板中生長的平均菌落數。
六、標準曲線的制作
利用biostatistics ORG數據分析軟件,以ABS值為橫坐標,以穩定期菌液濃度為縱坐標繪制標準曲線。