(1)母液的配制:
①大量元素母液。配制10倍液。用感量為0.01克的天平稱取大量元素,分別溶解攪拌均勻,加入蒸餾水使總量達到1升,即為大量元素母液。配培養基時,每1升取100毫升母液。
②微量元素母液:因用量少,常配制成100倍或1000倍母液,即每種化合物的用量增加100倍或1000倍。逐壹溶解混勻。配制 1 升培養基時,取 10 毫升或 1 毫升母液。維生素也可單獨配制,以方便配制不同培養基時使用。使用靈敏度為 0.001 克的天平稱量配制品的重量。
3.鐵鹽母液:鐵鹽單獨配制,用感量為 0.01 克的天平稱量,分別溶解,加水混合至 500 毫升。每升培養基取該溶液 5 毫升。
④維生素母液:用感量為 0.001 克的天平稱量,分別用容量瓶配制成所需濃度(0.1~10 毫克/升),使用時按培養基配方中所需量分別加入。
⑤植物激素的配制:單獨稱量,單獨保存,壹般配成 0.1~0.5 毫克/毫升的溶液。因大部分激素難溶於水,可采取
用以下方法配制。IAA(叫噪醋酸):先用少量95%酒精溶解,然後加水至壹定濃度。NAA(蔡乙酸):可用熱水溶解,也可用少量 95%的酒精溶解,然後加水至壹定濃度。2,4 a D:不溶於水,可用 lmol/L NaOH 溶解,然後加入壹定濃度的水中。可先用 lmol/L NaOH 溶解,再加水至壹定濃度。粗 KT(6 壹維二胺嗓)和 BA(6 壹葦基哆):先用少量 Imol/L 鹽酸溶解,再加水至壹定濃度。激素的用量,壹般用ppm和mol/L表示。
(2)培養基的配制:
①根據培養基配方的使用要求,從母液中取出(用量筒或移液管)所需的大分子元素、微量元素、鐵鹽、維生素和
植物激素等,放入燒杯中,加蒸餾水補足1000毫升。
②將瓊脂放入少量水中,加熱溶解後加入①中,不斷攪拌使其混合均勻。
③ 用 pH 計或 pH 紙測量 pH 值。用 Imol/L 氫氧化鈉或 Imol/L 鹽酸調節 pH 值至所需值。
④ 使用漏鬥將配制好的培養基分裝到培養用的玻璃容器中(試管、三角瓶或罐頭瓶均可)。這些玻璃器皿應事先清洗並烤幹。分裝後,用牛皮紙、鋁鉑紙或 2 至 3 層稱重紙密封。準備高壓滅菌。
⑤ 高壓滅菌。壹般用1.1公斤/平方厘米的壓力滅菌15~2O分鐘。時間不能過長或溫度不能過高,以免引起培養基的不和諧變化。滅菌後的培養基最好在 4~5℃ 下保存,含 IAA 的培養基應在壹周內用完,其他培養基使用時間不宜超過壹個月。正常情況下,應在半個月內用完。