龜苓膏中人參皂苷Rg1的測定-薄層掃描法
適用範圍：
本方法采用薄層掃描法測定龜苓膏中人參皂苷Rg1的含量。
本方法適用於中成藥龜甲參。
方法原理：
供試品經提取，過氧化鋁大孔樹脂柱，制成供試液，點樣，展開，用薄層掃描儀進行雙波長反射法鋸齒掃描，λS=541 nm，λR=700 nm，測定人參皂苷Rg1的吸光度積分值，計算人參皂苷的含量。
試劑：
1、氯仿
2、甲醇
3、鹽酸
4、硫酸
5、乙醇
6、人參皂苷 Rg1（中國藥品生物制品檢定所）
儀器：
1 儀器
1.1 薄層掃描儀
1.2 點樣裝置
壹般使用微升毛細管或相應的點樣設備。
1.3 展開室
可使用與薄層板大小相適應的專用玻璃瓶，平底或雙槽，瓶蓋必須密閉。
1.4吸附劑
二氧化矽 G，粒徑壹般要求為直徑 10-40 μm。
2 色譜條件
2.1 薄層板
二氧化矽 G 薄層板 0.5% CMC-Na 板，105℃活化 30min。2 展開劑
氯仿+甲醇+水=65+35+10，下層溶液置於10℃以下作為展開劑，4.2.3 顯色
用10%硫酸乙醇溶液噴灑，100℃烘烤至斑點顏色清晰。
2.4掃描條件
雙波長反射鋸齒掃描，λS=541nm，λR=700nm；靈敏度：中等；狹縫：0.4mm×0.4mm；線性化參數：SX=3。
樣品制備：
1.制備對照品溶液
精密稱取人參皂苷溶液，加五氧化二磷幹燥至恒重。精密稱取 10mg 人參皂苷 Rg1 對照品，加五氧化二磷幹燥至恒重，置 10mL 量瓶中，加少量甲醇溶解，再加甲醇至刻度（1mg/mL），作為對照品溶液。
2.供試品溶液的制備
取本品膠囊20粒，精密稱定，倒出內容物，混勻，取約2 5g，精密稱定，置索氏提取器中，加乙醚60mL，回流提取至近無色，棄去乙醚溶液，殘渣蒸幹乙醚，加甲醇70mL，回流提取至近無色，回收甲醇至幹，殘渣中正丁醇用水飽和。溶解 15mL 後轉移到分離漏鬥中，用正丁醇飽和水萃取 3 次（15、15、15mL），合並萃取液，用 1%氫氧化鈉溶液洗滌 3 次（15、15、10mL），再用正丁醇飽和水洗滌至中性，棄去水層，回收正丁醇至幹，殘渣用適量 70%乙醇溶解，然後轉移到純化氧化鋁中。D101型大孔樹脂柱[內徑1cm，D101型大孔樹脂高7cm（下層）；100-120目中性氧化鋁高3cm（上層）]，再用70%乙醇洗脫80mL，收集洗脫液，蒸幹，殘渣用甲醇使溶解，定量轉移至2mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
操作步驟：
1.建立標準曲線
分別精密吸取對照品溶液 1、2、3、4、5、6μL，於同壹 0.5%羧甲基纖維素鈉為粘合劑的矽膠 G 薄層板上，氯仿-甲醇-水（65:35:10）10℃下放置，下層溶液為展開劑，噴以 10%硫酸乙醇溶液，100 100℃，再噴以硫酸乙醇溶液，硫酸乙醇溶液，100℃烘至斑點顯色清晰。用薄層掃描儀依法掃描，以濃度為橫坐標，斑點面積積分值為縱坐標繪制標準曲線，計算回歸方程為 Y=773.3X 334.2，r=0.996，線性範圍為1.03-6.18 μg。
2.供試品含量的測定
精密吸取供試品溶液10 μL，對照品溶液分別為2 μL和4 μL，交叉定容。分別取4μL，交叉點於同壹以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的矽膠G薄層板上，依法展開，顯色，掃描測定，按外標法兩點法計算人參皂苷Rg1的含量。
註："精密稱量 "是指重量應精確到稱量重量的千分之壹。"精密測量 "是指所測體積的精度應符合國家標準對移液器體積精度的要求。
精密吸取對照品溶液4μL，於同壹薄層板上點樣6次，依法展開、顯色、掃描、測定，結果RSD為1.8%。