答:在組織培養過程中，我們所說的配方往往局限於激素的比例和添加劑的使用。實際上，基礎培養基的成分和培養條件(溫度、光照、濕度、PH等。)屬於公式的範疇。這方面的調整主要是根據實際訓練情況。在生根階段，已證明培養基或液體培養基的高滲透勢有利於營養物質和激素的運轉，有利於根的發生和質量，因此大多數植物在生根過程中需要調整基本培養基的組成。但具體需要應通過對比試驗來確定。
2.什麽是濾紙橋生根？
A: 1)濾紙橋生根技術是壹種瓶外分化苗直接生根技術。其主要作用是簡化生根過程，提高煉苗成活率，降低組培成本，同時最大限度利用汙染苗。
3.組織培養中黃化的原因有哪些？
答:黃化是指在組織培養過程中，由於培養基成分、環境、激素、碳水化合物等多種因素造成的整株失綠、葉片全部或部分變黃、產生色斑。這種現象在植物組織培養中很常見，尤其是在壹些木本花卉中。變黃的主要原因是培養基中缺乏鐵含量。礦物質營養不均衡；培養環境通風不良，瓶內乙烯含量增加；激素配比不當；糖分消耗不足或長期不轉移糖分已經耗盡；PH值變化太大；培養溫度不合適；光線不足等。
解決的辦法是:首先，在配制母液和培養基的過程中，要檢查儀器設備是否準確，還要仔細檢查每壹次稱量的每壹個環節；及時傳遞文化；使用透氣密封膜，提高瓶內通風；適當調整pH值、激素配比和無機鹽濃度；記得在配制培養基的時候不要忘記加糖；控制培養室中的溫度；適當增加光線；此外，加入抗生素如青黴素、鏈黴素、頭孢菌素等。有時會導致幼苗變黃，因此應減少或停止使用。
4.人造作業芽的形成有何妙處，怎樣才算是完整的人造作業芽？
答:壹顆完整的人工種子由體細胞胚、人工胚乳和人工種皮組成。
其優點是:1，人工控制培養條件，節地省工，直播。2.制作人工種子時，可以添加營養物質、植物生長調節劑、固氮菌、農藥等。3.用於生產人工種子的體細胞胚可以通過生物反應器高效率地大規模生產。4.壹些珍貴的苗木或樹種，可以通過人工種子加速其生產和應用。
問題:1。並不是所有的植物都能培養出大量高質量的體細胞胚。2.目前的人工胚乳和種皮還不夠理想，不能有效防止微生物腐蝕。3.人工種子的儲存需要進壹步改善。
5.組織培養中胚狀體和愈傷組織在外部形態上有什麽不同？
答:大量實驗證實，植物體細胞具有形成胚的潛力。體細胞形成的胚狀體稱為體細胞胚。壹般來說，在體細胞組織形成愈傷組織後的3周內，愈傷組織上出現大量的胚，這些胚來源於愈傷組織的外層細胞和深層細胞。
在體外或體內，體細胞經過原胚期、球形胚期、心形胚期、魚雷胚期和子葉期形成的胚胎稱為體細胞胚狀體。通常從外植體或愈傷組織的表面產生胚狀體。
愈傷組織向球形胚過渡的標誌是細胞分裂活躍，形成致密的細胞團結構，無表皮，可與疏松的愈傷組織明顯區分。
胚狀體的鑒別標準:(1)胚狀體是極性的，也就是說，在發育的早期，胚狀體在相對的兩端分化，莖端和根端分別出現，為單極結構。(2)組織學上，胚狀體的維管組織壹般與母體植株或外植體的維管組織無關，維管組織的分布呈“Y”形。
在根或芽的分化中，內部生長原形成層束，常與愈傷組織或外植體形成的維管組織相連。
6.光強lx是多少計算出來的？
答案:1)光強=光通量/單位面積。至於勒克斯的換算，對很多人來說比較抽象。推薦壹種簡單的轉換方法。
光是壹種輻射能，所以各種光源發出的光能都有壹定的強度。這種光能的強度稱為“光強”。壹般是燭光計算。即點燃特制的鯨油蠟燭，將其沿水平方向的發光強度作為基數-1蠟燭。目前電源發光的光源還是以燭光為主，稱為國際燭光。傳統上，我們稱之為瓦特。壹盞25瓦的電燈的光強度相當於25國際燭光。
2)光強的換算其實是需要腳燭的，但是我還沒有找到腳燭和日光燈的關系公式。
英尺燭光是距離光源壹米處每平方英尺的光強度。可以這樣說，規定標準蠟燭的光強(不知道這是否正確)是在壹米距離壹平方英尺的垂直面積內壹英尺燭光。
計算公式:1標準燭光= =10.76Lux。
3)因為光強和發光強度的單位換算中存在“標準燭光”的關系，所以我認為完全可以通過發光強度來推斷光強的相關性。因為同壹根標準蠟燭在同壹距離的光強應該是壹樣的，而熒光燈的瓦數和國際蠟燭是壹樣的，所以腳蠟燭也可以和熒光燈壹樣，也就是說和熒光燈瓦數相等。比如130W的熒光燈，壹米處的抗拉強度為30× 10.76 = 322.8lux。
但在組織培養生產中，需要知道30cm以內的光照強度。如果妳想轉換這個，妳必須找到另壹種方法-使用照度計。
7.如果在配制母液時將micro和marco放在同壹個罐子裏，會對植物產生影響嗎？
答:母液的制備主要是基於母液的穩定性。根據化學反應原理，大量高濃度微量元素中的陰離子對於微量元素的金屬離子來說是過量的，所以如果混合在壹起，微量元素中的金屬離子很容易發生水解反應，生成沈澱，從而失效。這樣的母液長期使用，會發生生理性疾病，如元素缺乏癥(黃葉、滯葉、萎縮變脆等。).
8.組培苗的生長環境有什麽特點？如何根據這些特點提高移栽成活率？
答:組培煉苗是組培過程中的重要環節，是壹個復雜的技術系統。提高煉苗成活率是決定組培成敗和降低組培成本的關鍵。試管苗壹般在高濕度(100%)、弱光(3000-4000Lux)、恒溫(25℃)條件下培養，長成的植株具有以下特征:
1，葉片無保護組織(角質層、蠟質、表皮等。)，而且細胞間隙大，氣孔大，水分散失快，容易萎蔫。
2.根無根毛或根毛很少，有些由愈傷組織發育而來的根與芽有不同的梳理組織，所以吸水能力弱。
但幼苗移栽時，環境發生了很大變化:濕度降低，光照增強，溫度升高，溫差增大。在這種環境下，具有上述特征的組培苗葉片失水嚴重，根系吸水能力不足，即吸水能力小於蒸騰水分，導致植株萎蔫，幼苗煉苗失敗。另壹方面，氣溫上升速度快於基質溫度，根系吸水能力在壹定範圍內與溫度成正比。當溫度升高，濕度較低時，葉片蒸騰作用迅速增加。此時基質溫度上不去，根系吸水能力不足，出現蒸騰大於吸水的不平衡狀態，導致萎蔫死亡。
為了獲得高的煉苗成活率，必須解決上述問題。壹方面，提高瓶苗質量及其抗逆性是關鍵，如生根前的壯苗、理想的生根配方和生根培養環境的調控；另壹方面，要根據組培苗的特點，創造適宜的煉苗環境，如保證空氣濕度，平衡空氣與基質的溫度平衡等。
9.這兩種媒體中使用的公式是相同的。為什麽壹個固化得特別好的人卻固化不了？以及誘導愈傷組織需要註意什麽？
答:培養基的凝固有以下幾個條件:
1.瓊脂的批次發生了變化，沒有做批次試驗，導致之前的劑量使用不充分。
2，大量元素重復添加，或者大量元素混合不正確。
3.PH調得太低，或活性炭高壓滅菌時間太長，導致蔗糖分解量急劇增加，影響培養基PH下降更多。
4.添加新的自然附件，或者附件太多。
另外，在愈傷組織誘導過程中，除了註意激素的搭配和應用外，還要註意培養物與瓊脂的緊密接觸，根據培養情況及時調整激素配比，及時切換，可以考慮明暗交替培養。
10.為什麽植物組織培養的培養基只用蔗糖而不用葡萄糖？動物培養的培養液中為什麽用葡萄糖代替蔗糖？
答:我覺得這個問題應該從植物和動物的生理機制來考慮。植物和動物最大的區別是植物是自養的(光合作用)，而動物是異養的(外部吸收和代謝)。植物的光合產物是多糖(兩種以上的糖，包括蔗糖)，貯藏產物是澱粉，澱粉的合成前體是蔗糖。蔗糖=葡萄糖+果糖，所以蔗糖的合成必須同時有葡萄糖和果糖。事實上，植物只能吸收葡萄糖和果糖。在組織培養中加入蔗糖，經過煮沸和高壓滅菌後會分解成可被植物吸收的葡萄糖和果糖形式。事實上，在組織培養中，植物似乎也具有偏異養的特性。如果培養基中缺少任何壹種糖的形式，植物的自養能力(光合作用、呼吸作用、產物代謝等)時必然會影響其生理代謝。)差。
與植物不同，動物是異養的。它們不需要澱粉積累和光合作用。動物細胞的生理環境和代謝方式決定了它們對糖形式的需求。
11.請問植物病毒檢測的簡單方法是什麽？
答:因為經過脫毒處理後，即使沒有完成脫毒植株，其體內的病毒含量也會較低，前兩次病毒檢測往往為陰性，所以建議前18個月必須對植株進行多次檢測。
目前，植物病害常用的檢測方法包括可見癥狀鑒定、寄生蟲鑒定、抗血清檢測、電鏡檢測、分子檢測等。可見癥狀的識別方法簡單，但準確性較差，對於不表現可見癥狀的隱病毒幾乎無效。電鏡檢測和分子檢測雖然檢測精度高，但設備昂貴，尤其是電鏡不可能在每個組培室都配備，所以在生產中應用不廣泛；目前，在生產中，國內外仍主要通過抗血清檢測植物病毒來鑒別寄主。
12.KT的母液壹般要配制成什麽濃度？IAA可以高壓滅菌嗎？蒸壓成分會變嗎？
回答:KT壹般是0.05-0.1ppm。
IAA極其耐高壓滅菌，壹般采用過濾滅菌。如果采用高壓滅菌，其分解率會在85%以上，使其效果不明顯。
13.如何通過組織培養培養出壹種不知名的植物？
答:作為未知植物的組織培養，我認為應該屬於稀有植物材料的範疇。壹是數量有限，二是從未命名，三是無文獻可查。如果這種材料具有優良的特性，就需要進行組織培養和快速繁殖。
壹般可以通過以下步驟進行工作:1。觀察植物的生物學特性，對植物進行分類，劃分屬和種。2.確定植物的繁殖方式(分蘗、種子、插條、根莖等。)並比較組織培養繁殖的優勢。3.根據植物特性(頂端優勢、分蘗能力等。)，確定組織培養的發生方式。4.建立少量無菌外植體體系，確定獲得高效外植體的方法。5.大量外植體的建立和誘導分化配方的設計。6.確定最佳分化繼代配方。6.繼承和繁衍。7.生根配方的設計與確定。8、試管苗出瓶。9.田間種植，觀察組培苗的生物學特性，與母本進行比較鑒定，確定優良性狀的遺傳穩定性。10，工廠化養殖，市場化運作。
14.我找不到合適的快速繁殖無毒苗的培養基。妳能給我推薦壹個嗎？
答:總結組培快繁的方式有三種:
1，外植體-愈傷組織-再生芽-繼代培養-生根-出苗
2、外植體-叢生芽-繼代培養-生根-出苗
3、外植體-生長-切取繼代-生根-出苗
至於采取哪種方式，需要深入了解組培苗的生物學習性，包括繁殖方式、頂端優勢、芽生真菌的生根能力等等。
15.在原代培養期間，外植體變白並緩慢死亡。原因是什麽？
答:很容易理解，這種情況發生在外植體的原代培養中。田間植物材料隔離後在不同環境中繼續存活和代謝需要壹個過渡。首先，植物材料應該從培養基中吸收養分，而不是從根中吸收，相對於植物材料在體外的吸收能力，鹽濃度可能是過量的。植物材料的褪色意味著葉綠素形成受阻，細胞代謝受阻。此外，培養基中營養供應的有效性滯後，並且植物材料本身的內容物損失到培養基中。建議在原代培養階段先用空白培養。
16.75%酒精和70%酒精有什麽區別？組織培養哪個好？
回答:70%和75%的酒精是可以的，但是往往因為桶內酒精濃度小於95%，按照70%是達不到要求的，所以我們壹般用桶內75%，瓶內70%。
17.大型消毒器消毒時，總會有個別瓶子破裂。原因是什麽？是溫度太高，壓力太大，還是內熱外冷不均勻造成的？
答:高壓滅菌造成玻璃瓶破碎，尤其是大型滅菌設備。我覺得最重要的是通縮降溫造成的。原因應該是在放氣過程中，由於體積較大，不同位置(內外)的壓力變化速度不同，導致瓶內外壓力差較大。如果是密封膜，可能是塑料薄膜的破裂。
18.制作培養基可以用自來水嗎？稀釋劑能用嗎？可以用糖嗎？我看不懂中等刻度。謝謝大家的回答。主要是轉化。如硝酸鉀在ms培養基中的用量為1650mg，碘化鉀為0.025mg，甘氨酸為0.0001mg。1mg，1l，1g到底是什麽？就我個人而言，我自己也想成為壹名ms。沒有分析平衡。怎麽辦。
答:在實際生產中，自來水經過簡單處理後可以作為組培用水。但是，如果配藥需要蒸餾水或純凈水。大量元素母液的配制可根據實際需要進行倍數化，如硝酸鉀用量為1.650mg/L，如果是20倍，則需要稱取為1.650 * 20 = 33g，以此類推，按正確順序溶解至100 L，配制培養基時測得的體積為1，000/。
另外，如果妳的配藥條件不是很好，我建議妳可以使用幹粉培養基，這樣可以節省很多投入和時間。
19.水解酪蛋白有酸水解和酶水解。使用過程中有什麽區別嗎？它們在培養基中的功能是壹樣的嗎？
答:水解酪蛋白(CH)和水解乳蛋白(LH)是多種氨基酸的混合物，能促進胚狀體和不定芽的分化。通常，劑量為500毫克/升，尤其是當有高水平的IAA時。
酪蛋白無論是酸解還是酶解，作用都是壹樣的，但考慮到組培苗的異養功能，酸解應該更有利於其發揮作用。
20.在原代培養階段，成功誘導出綠色愈傷組織。繼代培養時，愈傷組織迅速增殖，但始終沒有出芽。如何解決不產生不定芽的問題？
答:愈傷組織誘導成功後，如何有效地誘導不定芽非常重要。外植體愈傷組織形成的時間和愈傷組織生長的程度因植物種類和培養條件的不同而有很大差異。有些植物很容易形成不定芽，可以從外植體受傷或未受傷的部位直接分化出不定芽。
壹般認為，細胞分裂素/生長素的比例是控制器官發生的重要因素，通過調節它們的適當比例，可以有效地控制愈傷組織的芽、根等器官的分化。根據這壹理論，愈傷組織誘導不定芽的能力與愈傷組織的狀態密切相關，能夠誘導分生細胞的形成是非常重要的。分生組織細胞排列有規律，越大的在外面，細胞越小，排列越緊密，細胞質越濃，細胞核越大。在激素配比的控制下，這樣的分生組織細胞很容易形成不定芽。這就是為什麽在愈傷組織產生的過程中要交替使用不同的激素。
大量繁殖愈傷組織然後再生幼苗似乎是壹種理想的方法。但反復繼代培養削弱甚至喪失了許多愈傷組織再生苗的能力，愈傷組織再生苗變異率增加，使得這種方法在生產中只適用於少數植株。
總之，這個問題除了化學控制因素還有物理原因，還有很多問題限於篇幅，這裏不再贅述。
21.NAA和2，4-D，哪種生長素促進愈傷組織誘導效果更好？
答:對於愈傷組織的誘導和增殖，2，4-D比NAA更有效，但有壹個問題。在許多情況下，2，4-D誘導的愈傷組織更難再生芽。
22.滅菌固化後，培養基上總會有壹層水。請問老師這是不是因為培養基有問題。如果植物材料轉移到這樣的培養基上，會導致整瓶苗玻璃化嗎？或者會發生什麽其他後果？
答:培養基滅菌後會有或多或少的積水，壹般來說冬天會輕壹些。如果接種時倒出過多積水，否則容易造成容器壁上水滴較多，影響光照，從而加重玻璃化現象。
23.洋蔥在培養基中除了殺菌還有什麽作用？
答:培養基中添加的洋蔥，除了抑菌作用，和其他有機添加劑的作用是壹樣的。在種子發芽試驗中加入激素，變異概率低，可以忽略不計。
24.有些樹種受傷後會分泌壹些白色漿液，比如元寶楓。無論是莖段還是葉片，凡是有傷口的地方都會有漿液，加重外植體的褐變。我該怎麽辦？
答:這是植物的出血現象。由於傷流液中含有酚類物質，容易造成培養物褐變。許多研究表明，選擇合適的外植體和培養條件是克服褐化的最重要手段。壹般來說，外植體應具有較強的分生能力。在最適宜的細胞脫分化和再分化培養條件下，外植體可以處於旺盛的生長狀態，可以大大減少褐化。適當的溫度和全暗培養也能顯著降低外植體的褐化。
液體培養和連續轉移也是很好的措施。此外，加入壹些氧化劑或用抗氧化劑對材料(外植體)進行預處理或預培養，可以大大降低醌類的毒性。這些抗氧化劑包括:VC、檸檬酸、硫代硫酸鈉(Na2S2O3)等。此外，0.1%-0.5%活性炭對酚類氧化物的吸附效果也很明顯。
25.在組織培養中，葉子很容易脫落。是什麽原因造成的？
答:落葉是逆境的表現。溫度過高、通風不良、培養過密、有害氣體(乙烯、氨、甲醛)的積累都會導致植物材料的葉片脫落或變黃。
26.空白文化是什麽意思？
答:空白培養是建立高效外植體系統的壹個非常有用的步驟。空白培養是不添加任何激素的培養過程。這對於外植體快速適應瓶內環境並建立有效的外植體群體非常有用。
27.如果芽只是長高了，不膨脹不分化，有的還是，是什麽原因？
答:如何成功啟動成活的外植體是組織培養過程中最重要的環節之壹。因為田間植物材料的激素水平和細胞活性差距很大，所以有很多方法可以使外植體快速對培養基條件做出反應。第壹，芽萌發用赤黴素，暗培養，激素高低搭配會起到很好的作用。
28.在壹些材料中，我經常看到meq/l，表示溶液的總離子濃度。但我還是不明白。是離子還是電荷？比如0.1M/L硫酸鎂溶液，用meq/l表示，應該是100meq/l還是400meq/l？和離子攜帶的電荷有關嗎？
答:毫克當量(mEq)是指物質的化學活性或合力相當於1mg氫。1毫克氫，23毫克鈉，39毫克鉀，20毫克鈣，35毫克氯都是1毫克當量。轉換公式如下:
Meq/l = (mg/l) ×化合價/化學結構量
毫克/升=(毫克當量/升)×化學結構數量/化合價
Um/L=(mEq/L)/化合價
(註:化學結構式=原子量或分子量)
由此看來，0.1M/LMgSO4=(mg/L)×化合價/化學結構量。
=0.1×1000×4×120/120
= 400毫當量/升
如果是水質檢測，金屬離子(雜質)Mg2++是200meq/L，不知道對不對？
29.芽用於分化芽啟動愈傷組織時，NAA與6-BA的比例有壹般規律嗎？同樣，將起始於2，4-D的愈傷組織轉移到僅含NAA和BA的培養基中，愈傷組織變成綠色。有可能區分嗎？
答:離體愈傷組織是壹種增殖的無組織細胞群，幾乎可以從任何類型的植物中獲得。外植體形成的愈傷組織很少是自發的，這代表了創傷反應的擴大。壹般培養基中需要生長素，同時往往需要細胞分裂素的存在。能最有效地產生愈傷組織的激素濃度因所用的植物和器官而異，但它往往高於從外植體直接誘導幼苗所需的濃度。
大多數植物的愈傷組織可以從外植體上分離，並可以繼代培養和連續繁殖。所用培養基中的激素水平與用於愈傷組織誘導的相同。如果降低激素水平或適當調整生長素與細胞分裂素的比例，壹些愈傷組織將再生幼苗或胚胎。
30.培養基裏也可以加洋蔥？能說說它的機理嗎？
答:培養基中添加有機添加劑，如土豆、香蕉、椰子汁，主要是因為它們富含糖、蛋白質、各種無機鹽、維生素和各種活性物質。洋蔥也不例外。洋蔥除了營養豐富外，還含有豐富的含硫化合物，含硫化合物是強有力的抗菌成分，可以殺死多種細菌。可以說，在很多參考文獻中提到洋蔥在組織培養中的應用不是沒有道理的。
31.在壯苗的生根培養基上培養，會出現黃葉，看起來苗很爛，葉子枯萎。是什麽原因造成的？
答:組培苗黃化是由培養基成分、環境、激素、碳水化合物等多種因素造成的。但是這個解釋比較抽象。我覺得在壯苗生根階段，因為培養基的變化，尤其是激素的變化，高壓滅菌後培養基的PH變化和分化階段有很大的區別。此外，幼苗與培養基的接觸面積變小，養分供應滯後。所以很多時候，根發出來，就會有不同程度的變化。如果解決了，確定高壓滅菌後生根培養基的PH值變化並進行適當的調整，同時在分化時對壯苗進行適當的調整，也是壹個很好的方法。
32.請問:(1)接種前，接種工具要用酒精浸泡。酒精濃度是多少，75%還是95%？(2)以麝香百合的鱗片為外植體。我有沒有註意到可以減少汙染的去鱗方法？書上說，根據極性方向，接種到培養基中如何判斷極性？(3)用玻璃瓶和不吸鋼的蓋子做培養容器，透氣性不好嗎，會影響培養效果嗎？
答:接種燒前浸泡在接種工具中的酒精濃度可以是75%，也可以是95%。至於極性，意味著植物材料傾向於發展。比如莖繁殖，靠近莖芽頂端，遠離頂端就會長出根來。在根繁殖的情況下，新芽發生在心臟附近，新根發生在遠心處。所以接種時盡量不要倒置材料，盡量保持植株的極性取向，不要將莖尖插入培養基中。培養容器的透氣性是決定瓶內濕度和氣體狀況的主要因素，所以如果密封過嚴，瓶內外的氣體交換都會受到不同程度的影響。
33.有什麽方法可以將懸浮培養的植物細胞分散形成單細胞？
答:首先選擇壹個外觀疏松、易破碎、生長快的淺色愈傷組織，然後用接種器簡單粉碎後放入液體培養基中進行振蕩培養。經過1-2周的培養，懸浮液中既有遊離的單細胞，也有易破碎的細胞團和大的愈傷組織塊。為了增加培養物中單細胞的比例，需要使用薄口移液管或註射器僅吸出遊離單細胞或小細胞團用於傳代培養中的接種。必要時可加入少量果膠酶，培養基和瓶壁上會出現大量單細胞和小細胞團。收集後，將它們轉移到新鮮的培養基上，放在搖床上再次進行繼代培養。
也可以停止搖動第壹代細胞懸液，使大細胞塊和組織沈澱在容器底部，取上層懸液接種，或在無菌條件下用紗布和不銹鋼網過濾，用濾液接種。對於分散性差的物料，反復轉移後，分散程度會大大提高。
34.生化培養箱可以進行什麽培養，可以進行植物組織培養嗎？它和光培養箱有什麽區別？
答:光照培養箱主要是模擬植物的光照條件，更適合做植物培養、種子發芽等實驗，而生化培養箱更側重於溫濕度的控制，微生物實驗更適合。
35.高壓滅菌後培養基的PH值會升高還是降低？MS和1/2MS哪個培養基PH值變化大？
答:滅菌後培養基的PH值會下降0.2左右，這主要是由於有機物的分解，尤其是維生素、氨基酸和糖類，所以MS的變化會大於1/2 ms..
36.如何從外觀上辨別內生菌造成的汙染？
答:內生菌是指在生活史的某壹階段或所有階段，生活在健康植物各種組織器官的細胞間隙或細胞內的細菌。通過組織學方法、從表面嚴格消毒的植物組織中分離或從植物組織中直接產生和擴增微生物DNA，可以證明它們是內生的。
在植物組織培養中，壹般的表面消毒方法無法去除材料中的內生細菌，將材料帶入培養過程，從而造成組織培養中的汙染，稱為內生細菌汙染。
從汙染狀態來看，發生在植物材料周圍，壹般從培養基內部向外部延伸，發生的時間會比接觸汙染長。接觸菌壹般2-4天出現，內生菌會超過4天，細菌種類比較單壹。
-