妳應該做的是蛋白質電泳。只能用垂直電泳。水平電泳用於分離DNA或RNA。
實驗11 SDS-PAGE用於檢測表達的蛋白質。
1.
學習SDS-PAGE的基本操作，學會用SDS-PAGE檢測蛋白質。
2.原則
加熱變性後，蛋白質與SDS結合，帶負電荷。在電場的作用下，它向正極移動。結果按照分子量的大小排列在橡膠板上，含量高的蛋白條帶粗。
3.裝備
渦旋混合器、微量移液器取樣器、移液器吸頭、1.5ml微量移液器、雙面離心管架、臺式冷凍離心機、制冰機、超聲波粉碎機、電磁爐、電泳儀、立式電泳槽及配套玻璃、密封條、梳子等。、菌搖試管、三角瓶、接種圈、飯盒。
4.試劑
SDS(十二烷基硫酸鈉)、Acr(丙烯酰胺)、雙(N，N’-亞甲基雙丙烯酰胺)、三(三甲基氨基甲烷)、甘氨酸、鹽酸、Aps(過硫酸銨)、TEMED(四甲基乙二胺)、蛋白質分子量標準(97.4、66.2、43、365438。
為實驗做準備
1.0摩爾/升Tris HCl，pH 8.8(儲存於4°C)；0.5摩爾/升Tris HCl，pH 6.8(儲存於4°C)；10%SDS(室溫保存)；30% ACR/BIS(30克ACR+0.8克BISDD水至100毫升，儲存於4°C)；10% APS(儲存於-20°C)；2?上樣緩沖液(0.5mol/L Tris HCl，pH6.8 2mL，甘油2mL，20%SDS 2mL，0.1%溴酚藍0.5mL，b-2-巰基乙醇1.0mL，dd水2.5mL，室溫保存)；5?電泳緩沖液(Tris 7.5g，甘氨酸36g，SDS 2.5g，加入dd水至500mL，使用時稀釋5倍)；考馬斯亮藍染色液(考馬斯亮藍R250 0.25g+45ml甲醇+10mL冰醋酸，用dd水至100ml)；脫色液(95%乙醇:冰醋酸:水= 4.5: 0.5: 5，體積比)；
6.操作步驟
(1)將表達的細胞與2？將加樣緩沖液按照1: 1的比例均勻混合在微量離心管中。
(2)用超聲波破碎機進行10次脈沖，每次為10秒。每隔壹段時間放入冰中冷卻。註意超聲波探頭壹定要插在溶液的底部，這樣容易在溶液的表面或者上部冒泡！
(3)將微量離心管插入水漂，放入電磁爐鍋內的沸水中3-5min。然後立即將其插入冰中。(可以保存在-20℃的冷凍室中)。
(4)組裝電泳玻璃，用細橡膠管封好底部和側面再用夾子夾住(觀察老師示範)。插入梳子後，在玻璃上距離梳齒底部1厘米處做壹個標記。
(5)準備10%隔離膠。按順序取下列溶液，測量並混合在50毫升燒杯中(註意Tris為pH8.8):
丙烯酰胺-雙3.96毫升
1M Tris PH8.8 4.38毫升
每日飲水3.432毫升
10%十二烷基硫酸鈉118.8毫升
TEMED 9.9毫升
10%APS 118.8毫升
(6)加入APS後，拿起燒杯，輕輕旋轉底部幾下，使溶液混合均勻，然後立即慢慢倒入玻璃縫隙中，直到液面與所做標記齊平。剩下的膠水留在壹個小燒杯裏，斜放。然後用上部壹個1000ml的微量移液器沿著玻璃墻來回移動，灌滿dd水(盡量不要破壞下面的膠水)。然後靜置30分鐘。直到燒杯中剩余的溶液凝固。倒出蒸餾水，將玻璃杯倒置，盡可能多的排水。
(7)用配套膠。按順序和數量(註意體積單位！)取以下溶液，在50毫升燒杯中混合(註意Tris為pH6.8):
丙烯酰胺-雙0.675毫升
0.5M Tris pH6.8 0.563毫升
dd水3.165毫升
10%十二烷基硫酸鈉45毫升
TEMED 7.5毫升
10% APS 45毫升
(8)加入APS後，拿起燒杯，輕輕旋轉底部幾次，使溶液混合均勻，然後立即倒入玻璃的縫隙中，液面與玻璃的上邊緣齊平。然後慢慢插入梳子，靜置20分鐘左右。燒杯中剩余的溶液傾斜放置，直到溶液凝固。這種狀態可以用塑料薄膜包好，放冰箱過夜。
(9)小心拔出梳子後，用註射器針頭(切掉尖端)吸幹梳齒形成的加樣槽內的水，將加樣槽底部的橡膠面磨平。
(10)選擇幾個成型良好的加樣罐，在壹張紙上做好相應的標記，用微量移液器向壹側加樣罐中加入20mL蛋白質分子量，向其他罐中加入10 ~ 20 ml自制樣品。
(11)加樣完畢後，用微量移液器吸取電泳緩沖液，小心地將加樣槽中的液面加滿。電泳槽上部裝有電泳緩沖液(約250ml，淹沒加樣槽液面！)，將壹半電泳緩沖液(約180ml)倒入電泳槽下部。
(12)連接電極，並將電流調節至10mA。溴酚藍移至分離凝膠後，調節電流至18mA，電泳約2~3h。在此期間，隨時觀察電泳槽上部的液體是否泄漏(因泄漏導致液位下降，電流中斷)！當溴酚藍移動到離玻璃底部0.5厘米時，切斷電源。
(13)在搪瓷盤中準備適量考馬斯亮藍染料。
(14)倒出電泳槽內的緩沖液，取下玻璃，用鏟子從下方小心撬開有縫隙的玻璃板(膠水壹定不能損壞！)。用鏟子切掉上面的支撐膠，從玻璃上剝離分離膠。放入盛有倒置染液的搪瓷盤中(膠水壹定不能損壞！)。
(15)染色2小時後，將染液倒回瓶中重復使用。將脫色液倒入飯盒，過夜。
(16)觀察脫色膠中的藍色條帶，與對照比較或尋找異常粗的條帶，比較其分子量，判斷是否為預期的基因產物。
(17)清理桌面，寫實驗報告。