采集樣本,先取可疑食物,再取患者嘔吐物、剩余食物,或取患者糞便、血液。以及食品加工人員皮膚感染化膿引起的膿液。、
2.國標檢驗方法為GB 4789.6438+00-84,檢驗程序如圖5-9所示。
1)富集分離培養。
將25g樣品加入225mL滅菌生理鹽水中,或將5mL吸取液樣品加入50ml 7.5%氯化鈉肉湯中進行富集;同時選擇懸液,接種到血平板和Bakd-Rarker培養基中;可疑菌落接種血瓊脂平板進行純培養。然後做革蘭氏染色。
2)血漿凝固酶試驗
吸取0.5毫升1: 4的新鮮兔血漿於小試管中,然後加入0.5毫升已培養24小時的葡萄球菌肉膏肉湯培養物,搖勻混勻,每半小時在37℃的恒溫箱或水浴中觀察6小時。如果出現凝塊,則為陽性,同時以已知的陽性和陰性葡萄球菌菌株和肉膏肉湯作為對照。
血漿凝固試驗也可采用玻片法。在載玻片壹端滴兔血漿,然後用鉑耳挑取菌落與血漿混勻,在載玻片另壹端用生理鹽水代替血漿作為陰性對照。立即觀察混合舌,如果出現血塊則為陽性。
大多數致病性葡萄球菌產生血漿凝固酶,而非致病性葡萄球菌壹般不產生。因此,該方法是判斷葡萄球菌致病與否的重要指標。
3.腸毒素的測定
可以直接用樣品稀釋劑進行動物試驗,或者可以通過以下方式培養分離的菌株來制備腸毒素。
①腸毒素的制備:
腸毒素的制備包括固體培養法和液體培養法。
②腸毒素的測定:
註射前要給小貓餵少量食物,觀察反應。上清液根據小貓體重按100g 1mL劑量腹腔註射或口服。然後經過仔細觀察,壹般在攻毒後0.5 ~ 2小時內,幼貓出現嘔吐、腹瀉、體溫升高、畏寒等癥狀,4 ~ 5小時後逐漸恢復。同時以未接種細菌的培養基作為陰性對照。
4.血清反應
可用於檢測食品、培養物或濾液中的細菌或腸毒素。血清學反應不僅簡單快捷,而且可以定型毒素:
①細菌熒光抗體染色法
塗片:將食物樣品接種於葡萄糖肉湯培養基中,在37℃培養24 ~ 48小時。用接種環取上述增菌液,塗於載玻片上。
幹燥:每個培養物塗3 ~ 4個點,置於37度培養箱中幹燥。
固定:將幹燥後的載玻片放入凱氏定色劑中3-5分鐘,然後將固定後的載玻片標本浸泡在95%酒精中65438±0分鐘。
加入抗血清:然後充分幹燥,用接種環取1熒光抗血清輕輕加到菌膜上。
反應:然後讓它在37度的培養箱裏作用30分鐘。
沖洗浸泡:取出效果好的載玻片,用0.01 mol/L PBS溶液沖洗載玻片上的熒光血清,最後將標本浸泡在95%酒精精液中約1分鐘,然後取出用熒光顯微鏡檢查。
具有特定明亮熒光的為陽性,或者視野中有幾個或多個細菌的為陽性。
②毒素的檢測
金黃色葡萄球菌毒素蛇的檢測包括免疫瓊脂擴散法、反向間接血凝法、放射免疫法、免疫熒光法、酶聯免疫吸附試驗、A蛋白血凝試驗、核酸探針檢測、乳膠凝集試驗等。