摘要
將壹抗（單鏈抗體）標記到 膠體金 ，將抗原固定到試紙條上，通過競爭法定性檢測待測標本中的抗原。要求：檢測靈敏度達到5μg/mL。
1 試劑和耗材
名稱公司名稱公司名稱公司
A α2b註射液20μg/mL、金標抗體：單鏈抗體、質控線包被蛋白：標簽抗體、檢測線蛋白：抗原客戶提供吸水紙、底板、玻纖（金標釋放墊）、玻纖（樣品層析墊）、硝酸纖維素膜Millipore膠體金溶液、封閉液、金復溶液南京鐘鼎生物
2 主要實驗儀器材料
儀器名稱公司儀器名稱公司
離心機：Mini-14k型杭州奧盛儀器有限公司噴點系統（劃膜儀）：HM3030型、斬切機：ZQ2002 型上海金標
3 實驗步驟
3.1 標記
取1支1.5mL離心管用超純水清洗兩遍，吸取1mL膠體金加入管中，向管中加入14μL0.2M碳酸鉀後震蕩離心管使其混合均勻，加入8μg單鏈抗體，混勻後反應20min。加入200μL10%BSA封閉反應20min。在11000r/min 轉速下離心20min。棄去上清，用2mL 金復溶夜將沈澱復溶後鋪在6mm×300mm的金墊上幹燥。
3.2 點膜
將客戶提供的抗原稀釋至2mg/mL，用點膜儀噴點在NC膜上作為檢測線，將客戶提供的標簽抗體稀釋至0.6mg/mL，噴點在NC膜上作為質控線，55℃烘幹箱幹燥2h。
3.3 組裝檢測
在底板上從上到下依次粘貼吸水紙、NC膜、金墊（兩層）、樣品層析墊，用斬切機切成4mm寬的試紙條裝入卡殼中用以檢測。
3.4 金標抗體的驗證及靈敏度測試
檢測方法是用樣品稀釋液將A α2b註射液按照1:1的比例稀釋，然後取稀釋後的樣品60μL滴於試紙條加樣孔上，10min後判讀結果。
圖1 A α 2b不同濃度以及陰性對照結果
1：樣品稀釋液
2：0.5 μg/mL A α2b
3：2.5 μg/mL A α2b
圖1左1試紙條CT線都比較明顯，2號T線位置未完全抑制，3號基本完全抑制，試紙條檢測重組人幹擾素α 2b的靈敏度在5μg/mL左右。
3.5 加速穩定性實驗
用以上方法制作的試紙條放入37℃環境下3天和7天後，再拿出來檢測，結果如圖2和圖3。
圖2 試紙條37℃3天檢測結果
1：2.5 μg/mL A α 2b
2：0.5 μg/mL A α 2b
3：樣品稀釋液
圖3 試紙條37℃7天檢測結果
1：樣品稀釋液
2：0.5 μg/mL A α 2b
3：2.5 μg/mL A α 2b
圖 2、3 中可以看出試紙條在 37℃下保存 7 天對檢測性能沒有太大影響。
4 結果討論分析
經過以上實驗，試紙條檢測重組人幹擾素α 2b註射液的靈敏度在5μg/mL左右，試紙條在4℃密封條件下能穩定保存 6個月左右。
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