可見光和紫外光照射某些物質，主要是由於物質分子中價電子的能級躍遷對輻射的吸收，產生化合物的可見紫外吸收光譜。基於物質對光的選擇性吸收，建立了分光光度法或吸收光譜法的分析方法。它基於朗伯-比爾定律。
1
朗伯-比爾定律A = lg—- = ECL
T
其中a是吸光度；
t是透光率；
e為吸收系數，用(E1% 1cm)表示，其物理意義為溶液濃度為65438±0%(g/ml)，液層厚度為65438±0cm時的吸收值；
c為100ml溶液中所含被測物質的重量(以幹燥產品或無水物質計算)，g；
l是液體層的厚度，厘米。
二、使用範圍
任何具有芳香環或* * *軛雙鍵結構的有機化合物，根據在特定吸收波長下測得的吸光度，均可用於藥物鑒別、純度檢查和含量測定。
第三，儀器
可見紫外分光光度計。它用於波長範圍為200 ~ 400 nm的紫外區和400 ~ 850 nm的可見光區。它主要由輻射源(光源)、色散系統、檢測系統、吸收池、數據處理器、自動記錄儀和顯示器組成。
本儀器的工作原理是相對測量，即選擇某種溶劑(或空氣、樣品)作為標準(空白或參比)溶液，認為其透過率為100%(或吸光度為0)，而被測樣品的透過率(或吸光度)是相對於標準溶液的，標準溶液實際上是從出射狹縫發出的單色光，分別穿過被測樣品和樣品。
該儀器能準確測定有機化合物、具有芳環或軛雙鍵結構的有色物質或在適當條件下能與某些試劑反應生成有色物質的物質。
使用前，應根據儀器說明對測得的波長進行校正和操作。
第四，儀器的校準
1.波長準確度測試
用儀器顯示的波長值與單色光實際波長值的誤差表示，應在1.0nm範圍內。
儀器中氘燈的486.02nm和656.10nm譜線可用於校正。
2.吸光度準確度測試
3.雜散光測試
4.波長再現性測試
5.分辨率測試
動詞 （verb的縮寫）測定方法
1.對照品比較法
(1)分別按各品種項下的方法制備供試品溶液和對照品溶液，對照品溶液中被測成分的含量應為供試品溶液中被測成分標示量的100 10%，所用溶劑應完全相同。在規定波長下測量供試品溶液和對照品溶液的吸光度後，根據下列公式計算含量。
(2)計算公式
樣品A× G對/稀釋倍數× 100× 1
含量(%)=——————————×100%
壹對× g樣品/稀釋倍數× 100× 1
2.吸收系數法
(1)按各品種下的方法配制供試品溶液，在規定的波長下測定其吸光度，然後根據該品種在規定條件下的吸收系數計算含量。使用該方法測定時，應註意儀器的校準和檢定。
(2)計算公式
樣品
含量(%)=——————————×100%
g樣品/稀釋倍數× (E1% 1cm)對× 100× 1
3.計算分光光度法
計算分光光度法應謹慎使用。這個規律有很多種，都要按照每個品種下規定的方法來使用。在吸收曲線突然上升或下降的位置測定吸光度時，波長的微小變化可能對測定結果產生顯著影響，因此對照品和樣品的試驗條件應盡可能壹致。如果在測定中不使用參考物質，如維生素A測定，則在測定過程中應仔細校準和驗證儀器。
不及物動詞有關註意事項
1.空白溶液和試液必須澄清，不能有渾濁。如有渾濁，應提前過濾，棄掉最初的濾液。
2.除非另有規定，用於制備測試溶液的同壹瓶溶劑應用作空白對照，並且應使用65438±0cm的應時吸收池。
3.測試指定吸收峰波長2 nm範圍內幾個點的吸光度，以檢查供試品吸收峰波長位置是否正確。除另有規定外，吸收峰波長應在該品種下規定波長的±2nm範圍內；否則應考慮樣品的真實性和純度以及儀器波長的準確性，取吸收最大的波長作為測定波長。
4.壹般來說，測試溶液的吸光度讀數在0.3和0.7之間有很小的誤差。
5.吸收池要配對，否則會引入測量誤差。在規定的波長下，配壹個透光率差異小於0.5%的吸收池，必要時從最終測量中扣除吸收池之間的誤差修正值。
6.因為吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，所以在測定供試品的吸光度後，應減去空白讀數，再計算含量。
7.儀器的接地必須良好，所有外露部分的地電位不得超過24伏(測試筆的氖管不得發光)。
8.在使用過程中，如果需要打開樣品室的蓋子或暫時停止測試，壹定要及時按動快門旋鈕(關閉光電管的前快門)保護光電管，防止光電管受到強光或長時間照射而損壞。
9.測試或更換其他樣品時，用待測溶液沖洗吸收池3 ~ 4次，用幹凈的絲綢或鏡紙擦拭吸收池透光面，直至不留斑點(不要磨損透光面)。
10.取吸收池時，應取磨砂玻璃兩面，不要用手握住透光面，以免粘上油漬。用後及時用測定溶劑沖洗，再用純化水沖洗，用幹凈的絲綢或鏡紙擦幹，晾幹，放入吸收槽盒中，防塵保存。
11.如果吸收罐的內外壁都被汙染，兩個罐的差別就大了。
(1)可以用綢布裹住扁竹條，也可以用脫脂棉裹住蘸有乙醇的細玻璃棒，輕輕摩擦，然後用純凈水沖洗。
(2)如果上述方法處理不好，必要時可用重鉻酸鉀-硫酸洗液浸泡1 ~ 2分鐘，用自來水沖洗，再用純化水沖洗。
(3)不要用刷子刷洗或用硬物擦拭，以免表面光潔度受損，影響正常使用。
12.請始終保持矽膠幹燥，以保護光學元件和光電放大系統不受濕氣損壞，影響儀器正常工作。如果發現某些矽膠由藍色變為粉紅色，應立即更換。該儀器中有兩個幹燥劑盒:壹個安裝在放大器盒上，另壹個安裝在單色儀盒上。
13.更換矽膠幹燥劑時，請關閉電源。
14.在停機期間，主機樣品室應充滿袋裝或圓柱形矽膠幹燥劑。用防塵罩蓋住整個儀器，在防塵罩裏放幾袋防潮矽膠。
15.在儀器的操作中，狹縫的寬度要從小開始逐漸變寬。如果狹縫過大，放大器的輸出信號會因過多的光能強度進入光電管而飽和，使數字顯示溢出(即數字閃爍或顯示1不變)。這不是儀器故障。
16.將波長調至625nm，關閉0.02nm附近的凹口，選擇鍵返回停止位置(即三個鍵都彈出)。
17.移動儀器時，應在主體端移動，不要在樣品室、光電管盒端和光源燈室移動，以免儀器狹縫或光路組件受力變形。移動或運輸時，應固定可移動部分。比如旋鈕可以用膠帶貼上，縫隙位置要大壹點，然後固定。不要把狹縫翻下，以免運輸過程中振動損壞狹縫刀片。
18.儀器的光柵和反射鏡壹定不能擦拭，否則會損壞儀器的光學表面，增加雜散光。
19.儀器移動後，請及時檢查並校正波長準確度。為確保測定的準確性，請經常校準波長準確度。如有異常，應立即向質保部報告，但不得擅自調整，並及時記錄。
七。成績統計
A
E1% 1cm(測試樣品)=—
化學發光
E1 % 1厘米(測試樣本)
含量(%)=————————×100%
E1% 1cm(標準值或參考物質)
八、允許的差異
除非另有規定，儀器分析方法的相對偏差應在(2.0 ~ 3.0)%以內。
(來自百度博客)