母種和原種分別在試管中培養分離純化的銀耳菌絲體和樟樹菌絲體。生產母種時,先取出銀耳菌絲體,擴大到所需管數。然後在25℃培養至銀耳菌落直徑約為1cm。此時,在每個裝有銀耳菌絲體的試管中接種極少量的銀耳菌絲體,當它們長在壹起時,就可以出售或用於原種生產。
如果先嫁接樟樹菌絲體,由於樟樹菌絲體生長快,很快覆蓋斜面,消耗養分,然後銀耳菌絲體就不容易生長了。
如果將香灰菌絲和銀耳菌絲同時接種在壹個試管中,同樣會出現銀耳菌絲較少,香灰菌絲較多的情況。
因此,在生產銀耳母種(試管種)時,壹定要註意接種的順序,控制好兩者的比例。
銀耳及其“伴生菌”可以人工種植,用於食用和藥用。目前只有銀耳和銀耳屬於這壹類細菌。銀耳在其子實體的形成過程中,除了純銀耳菌絲體外,還必須有“伴生菌”即銀耳灰黴的幫助;黑木耳不僅要有純正的黑木耳菌絲體,還要有毛核菌的幫助,二者缺壹不可。正常情況下,銀耳和黑木耳的純菌絲體生長非常緩慢,分解木質素和纖維素的能力很弱。它們分別依靠香惠菌絲體和粗毛硬皮菌絲體的分解基質為其生長發育提供養分,否則不可能形成子實體。因此,銀耳母種和銀耳母種繁殖時,必須將兩種對應的菌絲體移植到同壹培養基上混合培養。以銀耳為例,介紹了兩種菌絲混合制種技術:
1.傾斜母種混合嫁接法(圖33-1)取離體純銀耳菌絲母種,進行新配。
將1支PDA斜面試管連同接種器壹起放入接種室(箱),按無菌操作進行轉移,即選取壹片米粒大小的菌種和培養基,轉移到空白試管的斜面培養基上,加棉塞後在22-24℃恒溫培養6-8天。當銀耳菌絲體長至繡球狀,如黃豆大小時,與香灰母種壹起移入接種室(箱),按無菌操作在距銀耳純菌絲團約2 cm處接種壹小塊香灰母種,培養2天後在接種塊上可見白色菌絲, 並且7天左右可以形成壹個白毛團覆蓋銀耳純菌絲團,12-15天就會覆蓋白毛團。
需要指出的是,利用銀耳和香樟混合母種進行原種擴繁時,應將斜面的前後兩端切掉,只用繡球狀的白色銀耳菌絲體和附近的深灰色香樟菌絲體進行轉移。所以1斜面母種只能接1瓶原種。
圖33-1傾斜母種混合方法
瓶裝木屑原種混合接種法(圖33-2)如果沒有純的銀耳菌絲,將銀耳孢子培養成孢子母種,再接種到瓶裝木屑培養基制成的銀耳母種中,進行混合培養。
根據接種要求,按照1湘輝斜母種與12-15瓶木屑培養基的比例,將湘輝菇母種的試管、滅菌後的瓶裝木屑培養基和接種用的設備壹起放入接種箱,按照無菌操作,用接種鏟挑取壹片湘輝菇母種,放入木屑培養基瓶中。接種後移至24-26℃培養,約2天可見到接種塊上萌發的白色菌絲。之後就要隔壹天檢查壹次,發現雜菌及時檢測排除。培養約11天時,樟樹菌絲體可伸入培養基中約3 cm。此時可觀察到培養基表面有灰褐色或深褐色分泌物,說明樟芝菌絲體生長旺盛,應及時接種銀耳母種。
按照1: 12-15的比例,取木屑培養基中的銀耳孢子母種試管和香菇栽培母種,放入接種室(盒)中,用無菌接種刀切開香菇菌絲體表層,再用無菌接種鏟挑取少量銀耳孢子,接種到香菇菌絲體中(圖33-2)。混勻後,移瓶至23-25℃培養,約10天後,在銀耳接種處可見到粗大的白色菌絲生長。進壹步培養18天後,出現紅黃色水滴,25天後可觀察到扭曲的子實體原基,說明培養成功。1瓶混合木屑可以膨脹到30-40瓶原種(二級種子)。
圖33-2瓶裝鋸末原種混合方法
1.銀耳孢子;2.香草;3.將香樟的表層切開;
4.采摘銀耳孢子;5.接種到香灰菌種瓶中。
三種原種的生產取決於原種的生長情況、耳基的大小和銀耳菌絲體“取食”的深度,決定了每瓶原種應擴大的瓶數。為了保證質量,盡量控制在40-60瓶以內。如果能把原種攪拌均勻,使銀耳菌絲體和香灰菌絲體混合均勻,每瓶原種也可能收到100-200瓶種植種子。
註意事項為了生產優良的銀耳菌株,除了無菌操作等上述要求外,還必須註意以下幾個方面:
1.生物特異性銀耳菌絲體和樟樹菌絲體的組合也具有特異性。因此,為了生產有效的銀耳菌株,必須從同壹木耳中獲得純培養物(包括酵母分生孢子或銀耳菌絲)和純香灰菌絲。不同地區或同壹地區的不同木耳(樹種)獲得的銀耳菌絲和樟樹菌絲不能隨意互換組合。否則就有衰落的可能。交換結合的效果必須根據銀耳菌絲體在木屑培養基中的定殖、耳基形成的大小和膜的開放程度來判斷。凡是能繼續生長,形成耳基,順利開片的銀耳菌絲體,都可以繼續擴大,用於生產,否則不能使用。
接種比例:根據銀耳菌絲體生長慢,樟樹菌絲體生長快。
這個特點,在純混培養中,壹定要註意銀耳菌絲體和灰樹花菌絲體的接種比例。為了控制接種比例,最理想的是先培養銀耳菌絲體,再與灰樹花菌絲體混合。說銀耳菌絲體的接種比例要達到1000:1(銀耳菌絲體發育到直徑lcm左右,裏面有上千個菌絲,只要配幾個香灰菌絲)也不為過。否則銀耳菌絲少,香會菌絲占絕對優勢,以後就不會出穗或出穗率低。如果在樟樹菌絲體中添加酵母樣分生孢子生產菌株,銀耳的酵母樣分生孢子數量非常多,每毫升培養液中銀耳的酵母樣分生孢子數量可達654.38+00億-654.38+00億個。由於酵母分生孢子分散在木屑顆粒中,並不是所有的酵母分生孢子都能萌發成菌絲,所以在木屑培養基中添加酵母分生孢子溶液用於樟樹菌絲體的生長。所以用這種方法制作銀耳效果並不理想。如果得不到銀耳菌絲,可將銀耳酵母分生孢子塗在有灰菌絲的木屑培養基表面,使銀耳酵母分生孢子容易萌發。
3.銀耳純菌株(酵母分生孢子或銀耳菌絲體)的培養條件
培養條件與銀耳原種和種植種(混合培養)有些不同。因此,壹定要註意混合培養的條件,使銀耳菌絲體和樟樹菌絲體都能適應相同的培養基和培養條件。比如溫度控制在20-28℃的範圍內(最好是23-25℃)。原種含水量控制在65%,種植種子含水量控制在65%-70%之間。由於原種子培養基略幹,有利於銀耳菌絲體生長,不易產生酵母樣分生孢子,有利於擴大成種植種子;但如果種植種子稍濕,則有利於酵母樣分生孢子的產生和繁殖。這種孢子液滲透到木屑培養基的深層,與香灰菌絲混合均勻,可以彌補銀耳菌絲“不深食而只長在表層”的缺陷,出穗率更高、更穩定。
還要根據每瓶的穗基部的生長狀況,確定原種是否可以擴大成種植種,每瓶要擴大多少瓶種植種。混合培養後,銀耳的酵母分生孢子能萌發,銀耳的菌絲體能繼續生長,木耳能繼續生長,都是具有實際應用價值的菌株。經過原種的嚴格挑選,每當耳基較大時,銀耳的菌絲生長較多(食之較深),樟樹的菌絲健壯有力,所以攪拌後的擴瓶數較多。反之,就不應該擴大到種植種類。保險起見,每瓶擴40-60瓶為宜。總之,每瓶新接種的培養基必須有銀耳菌絲體和香灰菌絲體,或者酵母樣分生孢子和香灰菌絲體。或者原種子攪拌後,用棉塞塞住,培養3-5天,使攪拌後的銀耳菌絲再生新的菌絲,以保證種植種子的質量。
4.凈化復壯,防止細菌因長期使用而失去活力,導致耳片發黃,開片困難,再生能力差。根據生產模式選擇不同年齡和生理成熟度的銀耳菌株。比如種壹塊木頭,要選擇樹齡小、成熟度低、氣生菌絲強——銀耳白毛團、不易糊化的菌株;瓶栽時要選擇菌脊大、成熟度高、白毛球小、易糊化、易開的菌種。節木中種植的菌種應選擇爬墻能力強、長羽狀枝條、木材分解能力強的菌種,而香灰菌絲稍有“弱化”的菌種作為替代材料種植,否則瓶瓶罐罐滿是香灰菌絲,有限的養分被香灰菌絲消耗,銀耳卻長不起來。
原種存放時間過長,耳基很大,培養基營養消耗過高,菌種生活力下降,應廢棄。否則使用效果還不如種下合適年齡的種子,然後擴大培養的菌種。
5.母種的保存母種應保存在4-65438±05℃的冰箱中。每1-3個月移植壹次。如果原種沒有馬上使用,也要保存在低溫幹燥的地方。瓶子裝滿後的45天內盡快播種。