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誰能給出測量抗氧化酶活性的具體方法?

研究汽車尾氣對小鼠血液中SOD、CAT和GSH-Px活性的影響。方法 將64只小鼠平均分為4個大組,1個大組作為對照組不通過汽車尾氣,2個大組通過汽車尾氣1小時,3個大組通過1.5小時,4個大組通過2小時。SOD活性和GSH-Px活性按照試劑盒說明進行測定,CAT活性采用KMnO 4滴定法測定。結果 隨著汙染程度的增加和汙染時間的延長,三種酶的活性均呈先升高後降低的趨勢,但酶的升高和降低趨勢並不完全相同。結論 生物能夠適應輕度汙染的空氣,但過度汙染會損害動物的防禦能力;SOD、CAT和GSH-Px在不同汙染程度下具有最佳比例,因此三種酶在體內構成壹個相互保護的防禦系統

隨著我國經濟的快速增長和居民生活水平的提高,交通運輸業開始爆發式增長,汽車尾氣汙染也越來越嚴重。汽車尾氣汙染也越來越嚴重。汽車發動機尾氣中含有碳氫化合物、氮氧化物、壹氧化碳、二氧化碳、醛類、乙炔等80多種物質,其中烯烴類碳氫化合物、二氧化氮和3-4苯並芘等對人體有害。如果汽油中添加了抗爆劑四乙基鉛,則尾氣中還含有鉛化合物 [1] 。汽車尾氣汙染問題已經引起了足夠的重視,因此尾氣汙染可能導致人體內自由基、H 2 O 2、脂質過氧化物等有害物質升高,從而引發壹系列健康問題。清除氧自由基、H2O2 和脂質過氧化物的酶有超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)和谷胱甘肽過氧化物酶[2](GSH-Px)。因此,我們研究了摩托車尾氣暴露小鼠的 SOD、CAT 和 GSH-Px 的變化規律,報告如下

1 材料與方法

1.1 材料 健康昆明小鼠 64 只,8-12 周齡,體重(18.4±2.3)g,購自山東大學醫學院實驗動物中心。小鼠購自山東大學醫學院實驗動物中心。試劑SOD 活性檢測試劑盒和 GSH-PX 活性檢測試劑盒購自南京健健生物研究所,KMˉnO 4 購自 Sigma。儀器:SIGMA3K30 高速冷凍離心機、島津 UV2401 紫外分光光度計、3 輛大陽摩托車(90#汽油)

1.2 實驗方法 汙染方法:將 64 只小鼠隨機分為 4 大組,每大組又分為 a、b 兩組:1、2、3、4 大組小鼠分別置於 1、2、3、4 號房間(各房間面積相同)。除 1 號房間未放置摩托車外,其他房間都放置了摩托車。放置 4 組小鼠後,摩托車在 2 號房間啟動 1 小時,在 3 號房間啟動 1.5 小時,在 4 號房間啟動 2 小時。摩托車熄火後,4 組小鼠繼續在每個房間呆到 24 小時,然後立即將 a 組小鼠帶出房間並放入冰箱采血(與 b 組小鼠的血清壹起用於酶活性檢測),而 b 組小鼠則繼續呆到 48 小時 < 48 小時 < 48 小時。b組繼續停留至48h

血液中酶的提取 [3]:排氣汙染結束後,迅速處死小鼠,取血,離心,收集血細胞,再用生理鹽水洗滌,離心,收集血細胞,用蒸餾水低滲裂解釋放酶,離心,取上清液。酶活性測定:取上清液測定 SOD 活性和 GSH-Px 活性,測定方法按試劑盒說明書進行,CAT 活性用 KMnO 4 滴定法測定

2.1 汽車尾氣對a組小鼠24h抗氧化酶活性的影響結果 大組a組為對照組,3種酶活性較低,2a、3a、4a組隨著汙染程度的增加,3種酶活性均有上升趨勢,但上升趨勢各有特點:SOD和CAT活性從第2組開始呈快速上升趨勢,而GSH-Px上升趨勢較慢。如圖 1 所示。

圖 1 汽車尾氣對小鼠 24 小時抗氧化酶活性的影響

2 汽車尾氣對小鼠抗氧化酶活性的影響2 汽車尾氣對48h時b組小鼠抗氧化酶活性的影響結果 1b組為對照組,但從2b組開始SOD和CAT活性開始下降,而GSH-Px活性仍持續上升,到3b組時活性開始下降,說明隨著汙染時間的延長,三種酶活性均下降,但下降趨勢不同。 如圖2所示。

圖2 汽車尾氣對小鼠8h抗氧化酶活性的影響

3 討論

汽車尾氣脅迫下小鼠體內3種抗氧化酶的活性隨著脅迫程度的加重而開始上升(如圖1所示),這是生物適應環境的需要。但酶的升高程度和趨勢並不完全相同:SOD 和 CAT 在開始時升高較快,GSH-Px 升高較慢,這表明生物體能夠適應某些汙染空氣。另壹方面,三種抗氧化酶的活性隨著汙染時間的延長而降低(如圖2),SOD和CAT在上升到頂點後首先下降,隨後GSH-Px也開始下降,說明長時間的汙染會損害動物的防禦能力。

SOD和CAT的上升速度快於GSH-Px,下降速度也快於GSH-Px,而GSH-Px的變化幅度較小,且始終比前兩種酶緩慢,這說明三種酶的變化是不同的,壹般來說,在不同的汙染程度下,SOD、CAT和GSH-Px可能有壹個最佳的比例,這樣三種酶就可能在體內形成壹個相互保護的防禦系統。第壹步可能是清除汽車尾氣誘導的小鼠體內的 H2O2 和超氧陰離子自由基,減輕和阻斷脂質過氧化的初級啟動,GSH-Px 對脂質過氧化物的還原減輕和阻止脂質過氧化的次級啟動,從而預防和減輕大分子的損傷和細胞毒性。

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