比色法 供試品本身在紫外-可見光區沒有強吸收，或在紫外光區雖有吸收但為了避免幹擾或提高靈敏度，加入適當的顯色劑，使反應產物的最大吸收移至可見光區。
用比色法測定時，由於顯色時影響顯色深淺的因素較多，應取供試品與對照品或標準品同時操作。除另有規定外，比色法所用的空白系指用同體積的溶劑代替對照品或供試品溶液，然後依次加入等量的相應試劑，並用同樣方法處理。
當吸光度和濃度關系不呈良好線性時，應取數份梯度量對照品溶液，用溶劑補充至同壹體積，顯色後測定各份溶液的吸光度，然後以吸光度與相應的濃度繪制標準曲線，再根據供試品的吸光度在標準曲線上查得其相應的濃度，並求出其含量。
5 註意事項
5.1 試驗中所用的量瓶和移液管均應經檢定校正、洗凈後使用。
5.2 使用的石英吸收池必須潔凈。當吸收池中裝入同壹溶劑，在規定波長測定各吸收池的透光率，如透光率相差在0.3%以下者可配對使用，否則必須加以校正。
5.3 取吸收池時，手指拿毛玻璃面的兩側。裝樣品溶液以池體積的4/5為度，使用揮發性溶液時應加蓋，透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭幹凈，檢視應無殘留溶劑，為防止溶劑揮發後溶質殘留在池子的透光面，可先用醮有空白溶劑的擦鏡紙擦拭，然後再用幹擦鏡紙拭凈。吸收池放入樣品室時應註意每次放入方向相同。使用後用溶劑及水沖洗幹凈，晾幹防塵保存，吸收池如汙染不易洗凈時可用硫酸發煙硝酸(3：1V/V)混合液稍加浸泡後，洗凈備用。如用鉻酸鉀清潔液清洗時，吸收池不宜在清潔液中長時間浸泡，否則清潔液中的鉻酸鉀結晶會損壞吸收池的光學表面，並應充分用水沖洗，以防鉻酸鉀吸附於吸收池表面。
5.4 含有雜原子的有機溶劑，通常均具有很強的末端吸收。因此，當作溶劑使用時，它們的使用範圍均不能小於截止使用波長。例如甲醇、乙醇的截止使用波長為205nm。另外，當溶劑不純時，也可能增加幹擾吸收。因此，在檢查所用的溶劑在供試品所用的波長附近是否符合要求，即將溶劑置lcm石英吸收池中，以空氣為空白(即空白光路中不置任何物質)測定其吸光度，溶劑和吸收池的吸光度應符合表3規定。
表3 以空氣為空白測定溶劑在不同波長處的吸光度的規定
波長範圍(nm) 220-240 241-250 251-300 300以上
吸光度 ≤ 0.40 ≤ 0.20 ≤ 0.10 ≤ 0.05
每次測定時應采用同壹廠牌批號，混合均勻的同批溶劑。
5.5 稱量應按藥典規定要求。配制測定溶液時稀釋轉移次數應盡可能少，轉移稀釋時所取容積壹般應不少於5ml。含量測定時供試品應稱取2份，如為對照品比較法，對照品壹般也應稱取2份。吸收系數檢查也應稱取供試品2份，平行操作，每份結果對平均值的偏差應在±O.5%以內。作鑒別或檢查可取樣品1份。
5.6 供試品溶液的濃度，除各品種項下已有註明者外，供試品溶液的吸光度以在0.3—0.7之間為宜，吸光度讀數在此範圍誤差較小，並應結合所用儀器吸光度線性範圍，配制合適的讀數濃度。
5.7 選用儀器的狹縫譜帶寬度應小於供試品吸收帶半高寬度的10%，否則測得的吸光度值會偏低，或以減小狹縫寬度時供試品溶液的吸光度不再增加為準，對於《中國藥典》紫外分光光度法測定的大部分品種，可以使用2nm縫寬，但當吸收帶的半高寬小於20nm時，則應使用較窄的狹縫，例如青黴素鉀及鈉的吸光度檢查則需用lnm縫寬或更窄，否則其264nm的吸光度會偏低。
5.8 測定時除另有規定者外，應在規定的吸收峰±2nm處，再測幾點的吸光度，以核對供試品的吸收峰位置是否正確，並以吸光度最大的波長作為測定波長，除另有規定外吸光度最大波長應在該品種項下規定的波長±2nm以內，否則應考慮試樣的同壹性、純度以及儀器波長的準確度。
5.9 用於制劑含量測定時，應註意供試液與對照液的pH值是否壹致，如pH值對吸收有影響，則應調溶液的pH值壹致後再測定吸光度。
1 簡述
紫外光-可見分光光度法是通過被測物質在紫外光區或可見光區的特定波長處或壹定波長範圍內光的吸收度，對該物質進行定性和定量分析的方法。本法在藥品檢驗中主要用於藥品的鑒別、檢查和含量測定。
定量分析通常選擇物質的最大吸收波長處測出吸收度，然後用對照品或吸收系數求算出被測物質的含量，多用於制劑的含量測定；對已知物質定性可用吸收峰波長或吸光度比值作為鑒別方法；若該物質本身在紫外光區無吸收，而其雜質在紫外光區有相當強度的吸收，或雜質的吸收峰處該物質無吸收，則可用本法作雜質檢查。
物質對紫外輻射的吸收是由於分子中原子的外層電子躍遷所產生，因此，紫外吸收主要決定於分子的電子結構，故紫外光譜又稱電子光譜。有機化合物分子結構中如含有***軛體系、芳香環等發色基團，均可在紫外區(200～400nm)或可見光區(400～850nm)產生吸收。通常使用的紫外-可見分光光度計的工作波長範圍為190～900nm，
紫外吸收光譜為物質對紫外區輻射的能量吸收圖。朗伯—比爾(Lambert-Beer)定律為光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析的依據，其數學表達式為：
A=log（1/T）=Ecl
式中：A為吸光度；
T為透光率；
E為吸收系數；
c為溶液濃度；
l為光路長度。
如溶液的濃度(c)為1%(g/ml)，光路長度(l)為1cm，相應的吸光度即為吸收系數，以 表示。如溶液的濃度(c)為摩爾濃度(mol/L)，光路長度為lcm時，則相應有吸收系數為摩爾吸收系數，以ε表示。
2 儀器
紫外-可見分光光度計主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、記錄儀、顯示系統和數據處理系統等部分組成。
為了滿足紫外-可見光區全波長範圍的測定，儀器備有二種光源，即氘燈和碘鎢燈，前者用於紫外區，後者用於可見光區。
單色器通常由進光狹縫、出光狹縫、平行光裝置、色散元件、聚焦透鏡或反射鏡等組成，色散元件有棱鏡和光柵二種，棱鏡多用天然石英或熔融矽石制成，對200～400nm波長光的色散能力很強，對600nm以上波長的光色散能力較差，棱鏡色散所得的光譜為非勻排光譜。光柵系將反射或透射光經衍射而達到色散作用，故常稱為衍射光柵，光柵光譜是按波長作線性排列，故為勻排光譜，雙光束儀器多用光柵為色散元件。
檢測器有光電管和光電倍增管二種。
紫外-可見分光光度計依據其結構和測量操作方式的不同可分為單光束和雙光束分光光度計二類。單光束分光光度計有些仍為手工操作，即固定在某壹波長，分別測量比較空白、樣品或參比的透光率或吸收度，操作比較費時，用於繪制吸收光譜圖時很不方便，但適用於單波長的含量測定。雙光束分光光度計藉扇形鏡交替切換光路使分成樣品(S)和參比(R)兩光束，並先後到達檢測器，檢測器信號經調制分離成兩光路對應信號，信號的比值可直接用記錄儀記錄，雙光束分光光度計操作簡單，測量快速，自動化程度高，但作含量測定時，為求準確起見，仍宜用固定波長測量方式。