2.抗原性:病毒中和試驗(VN)或瓊脂擴散技術表明,不同的NDV毒株之間存在微小的抗原性差異,但幾乎所有毒力不同的NDV都表現出單壹的相同抗原性。根據這壹特點,不同來源的疫苗株可在不同地區用於ND的免疫預防。
3.形態學:玖玖病毒顆粒在電子顯微鏡下呈多態性,大多數近似球形,直徑120-300毫米,有雙囊膜,表面有12-15毫米的纖毛,其抗原成分可刺激宿主產生紅細胞凝集素抑制抗體和病毒中和抗體。核殼由直徑 18 毫米的多線圈管組成,圍繞中心孔心軸呈螺旋對稱排列。核殼中心是病毒的核酸。
4.致病性:NDV 對雞的致病性在很大程度上由毒株決定,但也部分取決於感染的劑量和途徑,雞的品種與易感性的關系不大。
5.分子生物學:NDV由單股RNA單分子組成,分子量約為5×106道爾頓,約占病毒顆粒重量的5%,NDV基因組的核苷酸序列顯示由15156個核苷酸組成。Alexander(1981 年)使用聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)對純化的 NDV 進行裂解,證實病毒含有七種肽。Samaon 證實,NDV 基因組 **** 編碼六種蛋白質。
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6.生物活性:(1)血凝作用(HA):由於 NDV 株表面存在血凝素蛋白(HN),能與紅細胞表面受體結合,因此能凝集多種動物的紅細胞。如兩棲類、爬行類、鳥類、人類、小鼠、豚鼠、牛、羊、豬、馬等,其中雞紅細胞的凝集作用,不同品系都非常穩定。因此,血凝試驗(HA)和血凝抑制試驗(HI)已成為檢測該病的有效方法。
(2)神經氨酸酶活性:該酶存在於所有副粘病毒的表面,Huang 等的研究認為該酶與病毒與細胞膜的融合有關。
(3)溶血:NDV 有壹種溶血素,能溶解其凝集的紅細胞。冷凍和解凍、透析、超聲波振動和滲透壓淬滅都會增強病毒的溶血活性。
7.對環境的抵抗力:NDV對熱敏感,100℃時1分鐘可滅活,56℃時5分鐘至6小時可破壞病毒的感染性、紅細胞凝集活性和免疫原性,37℃時幾小時至幾天,20℃、8℃時需數月乃至數年才能滅活全部病毒。NDV在外界的穩定性取決於病毒所處的介質。在冷凍溫度下,蛋白質的存在對病毒有保護作用,會使消毒藥物失效。因此,消毒前應清洗幹凈,冬季消毒需在加熱條件下進行。
8.實驗室宿主系統:NDV 可通過實驗感染多種禽類和非禽類動物。然而,雞是該病的重要天然宿主,也是最常用的實驗動物。雞胚胎:所有 NDV 病毒都能在雞胚中復制,特別是在沒有特定病原體的 SPF 雞胚中復制,通常用於分離和復制病毒。不同毒力的病毒株在雞胚胎中復制到最高滴度所需的時間和導致死亡所需的時間上有所不同。當給 SPF 胚胎接種最低感染量的病毒時,快速株和中間株會在 60 小時或更短時間內導致死亡,而延遲株則需要 100 小時以上。快速毒株在胚胎中出現高滴度病毒的時間不到24小時,而慢速毒株則超過48小時。
細胞培養:NDV可在多種細胞中復制,現常用雞胚成纖維細胞作為病毒蝕刻形成的檢測單位,在細胞中蝕刻形成病毒後2-6天內,壹般在96小時進行觀察。病毒經高度稀釋後可在細胞內生長出單個蝕斑,單個蝕斑經連續幾代後可建立純系病毒克隆。1.除家禽外,實驗證明 NDV 還可感染 50 目鳥類中 27 目至少 236 種鳥類。該病新的流行特點是自然發病的食物種類增多,原來該病自然發病主要發生在雞和火雞,近年來家養的鵪鶉、鴿子和觀賞鳥也有發病的報道。並已從鴨、鵝體內分離出弱毒株,從養雞場捕獲的麻雀體內分離出新城疫病毒並檢測出抗體。
2、免疫雞群仍可發生新城疫,多發生在二免前的日齡。成年雞的發病率和死亡率不高。發病率高的可達75%,壹般3-15%,低的1.5%,死亡率高的可達80%,低的15%左右。
3、傳播:NDV不能通過蛋垂直傳播,病雞所產的蛋,在孵化的前4-5天,胚胎就會因感染而死亡。NDV在雞群中的主要傳播途徑是通過呼吸道的氣溶膠而發生,病雞通過呼吸道和消化道可將病毒大量排出體外。感染後 2 天左右、出現臨床癥狀前 1 天,病雞從呼吸道向空氣中排出病毒,治愈雞在癥狀消失後 1 周停止排出病毒,個別雞可排出病毒 1 個月以上。病毒在雞之間的傳播是通過雞的轉移和飼料、水、飼料袋以及人、車的交換進行的。1、臨床癥狀和特點:在我國根據臨床發病特點,可分為典型雞新城疫和非典型雞新城疫。
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典型雞新城疫:(主要包括速發內臟型、速發嗜神經型兩種),病雛(育雛雞)主要表現為明顯的呼吸道癥狀。病雞張口伸頸,咳嗽、氣喘、呼吸困難,發出 "呼呼 "聲,口腔內有粘液,搖頭吞咽,企圖吐出粘液,排出綠色糞便,有時帶血,繼而出現仰頭、扭頸或站立不穩等神經癥狀。非免疫雞群和免疫失敗的雞群都會發生這種類型的疾病。病雞通常在 2 至 8 天內死亡,幼雞的死亡率可達 90% 以上。成年雞發病主要表現為產蛋率急劇下降或出現腹瀉癥狀,產蛋率下降 30-70%,死亡率下降 10-50%。
非典型新城疫(包括中型、慢型、無癥狀腸型等):青年雞可死亡,成年雞可出現呼吸道癥狀,食欲下降,常並發大腸桿菌和支原體感染。這種類型主要發生在免疫水平低或免疫不整齊的雞群。成年雞群可能會出現產蛋量下降,並經常出現零星死亡,且持續時間較長。死亡率在 1-5% 之間。本型常與雞傳染性支氣管炎、雞支原體病混淆,常用血清學方法證明其感染。
2、病理變化:典型新城疫的主要病變在消化道,腺胃腫脹和乳頭狀出血,小腸有暗紅色出血竈,盲腸扁桃體腫大,有出血性潰瘍,病程較長的可見腸壁上形成外觀呈 "棗核樣 "的潰瘍,蛋雞卵黃破裂等。壹般以腺胃出血、盲腸扁桃體腫大潰瘍為新城疫的特征性病變,據此作為診斷依據。非典型新城疫:雛雞常見冠狀脂肪出血、腺胃腫脹、小腸卡他性炎癥、盲腸扁桃體、泄殖腔出血、氣管粘液增多、氣囊混濁、有酪樣物質。成年雞往往看不到任何病變。1、采集病料:有臨床癥狀的雞,從氣管和泄殖腔拭取樣品進行病毒分離。死雞的肺、腦、脾、肝、腎、骨髓等均可用於病毒分離。腦組織含毒時間較長,不易被其他細菌汙染,是較好的送檢材料。
2、病毒分離:病料加雙抗生素(每毫升1000單位青黴素,100微克鏈黴素)處理後經絨毛尿囊腔接種9-11日齡雞胚。強毒株和中毒株通常會在 36-96 小時內導致胚胎死亡,弱毒株也會導致胚胎死亡。也可通過將病料接種到雞胚成纖維細胞中進行病毒分離。將采集的尿液或細胞液作紅細胞凝集試驗(HA),出現凝集現象,再用已知的抗新城疫血清與尿液或細胞液作血凝抑制試驗(HI),凝集現象可被抗新城疫血清抑制,證實是新城疫病毒。
3.病毒毒力鑒定:常用的 NDV 毒力鑒定方法有雞胚平均致死時間試驗(MDT)、雞腦內致病力指數試驗(ICPI)、雞靜脈致病力指數試驗(IVPI)、空斑形成試驗等。目前,有許多檢測 NDV 毒力的新方法,如 Hodder 等(1994 年)、Wang Shushuang 等(1994 年)、Gu Changqing 等(2000 年)使用抗 NDV 的抗血清來檢測 NDV 的毒力。(Russel等(1983)、Alexander等(1997)利用針對表面糖蛋白的單克隆抗體進行毒株鑒定和分型。在國外,Marin 等(1996 年)、Ballagi(1996 年)、Angela(1998 年)等人研究了 PCR 技術用於 NDV 毒力檢測的可行性。
(1)雞胚平均致死時間(MDT):用滅菌生理鹽水將病毒稀釋 10 倍,每個稀釋度取 0.1 ml,分別接種 5 只 9-10 日齡的 SPF 雞胚。接種後的雞胚在 37°C 下培養 7 天,每天上午和下午各檢查壹次。記錄第壹個胚胎的死亡時間,胚胎全部死亡的最高稀釋度即為病毒的最小致死劑量(MDT),MDT為最小致死劑量(MLD)造成的胚胎死亡的平均時間。
(2)1日齡雞腦內致病性指數(ICPI):取1日齡SPF雞10只,每只接種0.05毫升用滅菌生理鹽水1:10倍稀釋的無菌尿囊液,連續8天,每天觀察1次,正常者記0分,發病者記1分,死亡者記2分。
(3)6 周齡雞靜脈致病性指數(IVPI):用 0.1 毫升無菌尿囊液稀釋的滅菌生理鹽水接種 10 只 6 周齡 SPF 雞,觀察 10 天,正常雞得 0 分,精神沈郁雞得 1 分,癱瘓雞得 2 分,死亡雞得 3 分。每次觀察每只雞的平均得分即為 IVPI。
Allan 等根據以上三項測定結果,可將 NDV 分為慢發、中發和快發。
4、血清學診斷方法:
取6-9日齡SPF雞,腿部肌肉註射0.1毫升滴鼻液作為首次免疫,2周後用油佐劑滅活疫苗0.5毫升肌肉註射,第5周采血分離血清,,可制成多克隆抗血清進行病毒鑒定和ND診斷。
HA和HI:抗原為2n稀釋,現多用96孔V型板(HA)。不明病料有血凝特點,可知血清有抑制作用,可做出診斷。2n稀釋後的血清為HI,可測定血清中的HI滴度,在感染雞群中HI滴度壹般不均勻,有報道有的雞群,低者為零,高者為1:1024。在免疫雞群中,HI滴度較整齊壹般可達1:32?/FONT>1:64。目前,HA 和 HI 由於操作簡便,使用方便。HI由於操作簡便,不需要特殊儀器,被廣泛用作雞場玖玖彩票網正規嗎診斷和免疫測定的常規方法。
除HA和HI外,血清中和試驗(SNT)、免疫擴散(IDD)、神經氨酸酶抑制試驗(NIT)、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、放射免疫測定(RIA)等也被報道用於雞場玖玖彩票網正規嗎診斷、
Adair等人(1989年)認為,檢測NDV抗體的酶聯免疫吸附試驗(ELISA)重復性好,特異性和靈敏度高,與HI相比效果好。Adair 等人(1989 年)認為,檢測 NDV 抗體的 ELISA 具有可重復性、高度特異性和靈敏性,與 HI 顯著相關,並能區分保護性抗體。使用單克隆抗體技術鑒定 NDV 株系已被廣泛報道。目前,這些不同的方法尚未在生產實踐中作為常規的疾病監測手段。1、疫苗種類及其選擇:我國生產的雞新城疫疫苗主要有兩種,壹種是弱毒活疫苗,另壹種是滅活疫苗。弱毒疫苗毒力由弱到強依次為Ⅲ系(F系)、Ⅱ系、Ⅳ系和部分克隆株(如克隆-30、克隆-83、克隆-79等)、Ⅰ系。在弱毒疫苗的選擇上,雖然 F 系列毒力弱,但免疫原性差,目前暫不使用;Ⅱ系列毒力弱,安全性好,優先用於首次免疫、Ⅳ系和壹些克隆毒株毒力比Ⅱ系稍強,免疫原性和安全性好,已被廣大養雞場特別是規模化養雞場廣泛應用於各種日齡的雞。免疫時,在大型雞場應慎用,以防散毒和帶毒引起的非典型ND回潮發生,在農村土雞和小型雞場應主要使用,近年來也有使用Ⅰ系疫苗對1日齡、20-25日齡雞群進行免疫的報道,取得了較好的免疫效果,但在使用方法和配合上是應嚴格控制的。目前,ND滅活苗主要是由甲醛滅活的弱毒添加油佐劑制成,ND油佐劑滅活苗安全性好,免疫力強,HI滴度高於弱毒苗,可用於弱毒苗免疫後的強化免疫,在疫病汙染嚴重的豬場使用滅活苗與弱毒苗聯合免疫,免疫效果更好。目前,ND弱毒苗和滅活苗也有與其它病毒***配制成聯合疫苗的(如:ND-IB、ND-EDS、ND-EDS、ND-IB-IBD等二聯苗或三聯苗),但以單苗效果較好,在疫區和疫病汙染嚴重的豬場,特別是免疫初期,最好使用單苗。
2、免疫程序:玖玖彩票android客戶端免疫程序應根據飼養管理、流行病學情況、環境因素、雞的免疫狀態和疫病流行情況來設計。不同地區、不同雞場的免疫程序不能壹概而論。
首次免疫:雛雞可通過蛋黃從母體獲得的被動免疫抗體,雛雞免疫後,抗體可在雛雞體內存活3-5天,雛雞免疫後,抗體可在雛雞體內存活3-5天。酌食潤蓮範冒?餼浠R話門天宮咳銜Τ隹噎岡竽純固u邏鶉丈?餼浠/FONT>5-7日齡達到高峰,9日齡逐漸下降,28日齡完全消失,母源抗體的半衰期為4-5天(平均4.5天),為了推算最適宜的首免日齡,壹般在出殼第壹天抽血檢查HI滴度,每批雛雞大量抽檢不低於0.1%。1日齡雛雞母源抗體平均值換算成對數值,按公式計算:
雛雞首次免疫最佳日齡=4.5×(1日齡HI-4對數值)+5
例如、壹批雞 1 日齡的平均 HI 效價為 1:32,即 log25,則該批雞的最佳首次免疫日齡按下式計算:4.5 x (5-4) + 5 = 9.5 天。
各地報道和使用的免疫程序尚難統壹,筆者認為:對於農村專業戶和小型養雞場,可在7日齡用Ⅱ系苗滴鼻首次免疫,21-25日齡用Ⅳ系苗重復免疫壹次,60-70日齡用Ⅰ系苗加強免疫接種壹次。大型雞場的蛋雞可在 10 日齡左右進行第壹次免疫(Ⅱ系滴鼻),21 日齡進行第二次免疫(Ⅳ系飲水和噴霧)、35-40 日齡接種第三針(Ⅳ系飲水和氣霧劑),60-70 日齡接種第四針(Ⅳ系飲水和氣霧劑),110-120 日齡接種第三針(Ⅳ系飲水和氣霧劑)(油苗)。商品蛋雞在整個產蛋周期內不再進行免疫接種。種雞在產蛋高峰後 280-300 天再次免疫,以確保種蛋中的母源抗體水平。如果在第二、三、四次免疫中使用了油苗加活疫苗,則這三次免疫可以省略。商品肉雞壹般只免前2-3次,只用弱毒疫苗。
3、免疫效果監測:每次免疫後10天,抽取1/1000只雞進行測定,HI滴度提高2個以上,如免疫前為1:8,免疫後為1:32.為合格,如果免疫後抗體滴度很低,只有1:4?/FONT>1:8,應重新註射。
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4、免疫失敗的原因:(1)疫苗的問題:使用的弱毒活疫苗HA效價應≥1:640,油乳劑滅活疫苗不能有嚴重的油水分層現象。應正確選擇疫苗種類和劑量,盲目增加劑量也可能在免疫後發生。
(2)首次免疫日齡不當:免疫時間過早,疫苗受母源抗體幹擾,免疫時間過晚,母源抗體已降低,不能起到有效的保護作用,雛雞可能在疫苗產生有效免疫力之前就已感染,這兩種情況都會造成免疫失敗。
(3)免疫方法不當:首次免疫不能用氣霧免疫,以免引起支原體感染等應激綜合征。如用飲水免疫,應嚴格控制水質,避免漂白粉和金屬離子對疫苗的破壞,可用井水或自來水煮沸冷後再用。水中加入1%的鮮牛奶或脫脂奶粉,對疫苗病毒顆粒有壹定的保護作用。飲水前要斷水,夏季斷水4小時,冬季斷水6小時,飲水器的數量足以保證每只雞都能喝到足夠的水,疫苗也能在30分鐘內全部喝完。
(4)雞的健康:已證實雞傳染性法氏囊病、雞傳染性貧血因子病、早期雞白痢嚴重感染會影響雞的免疫功能。據報道,患 IBD 的 1 日齡雛雞對 ND 的免疫抑制率可達 40%,7 日齡時達 32.5%。另外,目前廣泛使用的IBD弱毒疫苗免疫後都會對法氏囊產生短期可恢復的破壞作用,在安排免疫程序時,也壹定要將ND疫苗免疫安排在IBD弱毒疫苗使用前幾天。
5、發病後的措施:
(1)綜合措施:發病後對場地、用具、物品等進行嚴格徹底的清洗消毒,使用過氧乙酸、百菌清等,死雞深埋。可根據情況進行緊急接種,成年蛋雞發生非典型新城疫後,壹般不緊急接種可以耐受,但雛雞或育雛雞發生新城疫時應采取緊急預防註射的方法,常可收到終止疫情的作用。雛雞可用Ⅳ系苗(或克隆30或Ⅱ系,滴鼻或滴眼),中雛及以上可註射兩倍量的Ⅰ系苗(但大型雞場應慎用Ⅰ系)也可用油乳劑單苗註射。緊急接種會加速部分感染雞的死亡,緊急接種後 7-10 天內可停止雞的死亡。緊急接種疫苗的保護水平還取決於入侵野毒株的毒力、雞群原有的抵抗力以及飼養管理條件等因素。
(2)治療:無特殊藥物,有條件的可用異源血清(牛、羊高免血清)1ml/kg體重進行皮下或肌肉註射。也可用高遊離蛋黃液,1-2ml/只,皮下或肌肉註射。在壹定程度上可有效控制疫情。在使用高免卵黃液時,如果供蛋雞群為非 SPF 雞群,尤其是種雞和蛋雞,則應慎用,可能會帶入白痢、支原體病、EDS 等病原,導致生產性能低下。對於商品肉雞,使用高無蛋黃含量的蛋黃不會有太大問題。