根據其物理性質,培養基大致可分為兩類,即固體培養基和液體培養基。加入壹定量的凝固劑(如瓊脂、明膠等。)的培養基是固體培養基,而不添加凝結劑的是液體培養基,具體應用應根據培養目的的不同要求來選擇。
固體和液體培養基的基本成分都差不多,壹般可以分為兩部分,即基本培養基如MS、B5、N6、Nitsh等。以及附加成分如激素和天然添加劑等。基本組件如表1和表2所示。
表1幾種培養基主要成分表
表2幾種培養基的附加成分表
2.培養基的制備
(1)母液的制備和保存由於栽培的植物不同,需要配制不同的培養基。為減少工作量,藥物可先制成母液(即濃縮液),壹般膨脹10 ~ 100倍,其中常量元素倍數略低,壹般10 ~ 20倍,微量元素、有機成分、鐵鹽倍數可膨脹50 ~ 100倍。母液的配制和保存應註意以下幾個方面:①藥物稱量要準確,特別是微量元素化合物要精確到0.0001g,大量元素化合物要精確到0.01g。②配制的母液濃度適宜,倍數不宜過大。壹是長期存放後容易沈澱。第二,濃度高的話,用量小,配制培養基時容易影響準確性。(3)母液儲存時間不宜過長,壹般為幾個月左右。應在配制好的母液容器上標明配制日期,以便定期檢查。如有渾濁、沈澱、發黴,則不能使用。④母液應保存在2~4℃的冰箱中。
(2)配制培養基,首先根據培養基配方計算母液吸取量,依次吸取,然後加入蔗糖溶液,加蒸餾水至所需體積,用0.1 ~ 1 mol/L鹽酸或氫氧化鈉調節pH,加入瓊脂,加熱至融化。制備的培養基應趁熱分裝,倒入培養容器如試管和三角瓶,通常倒入容器650。
(3)培養基的消毒由於培養基中含有豐富的營養物質,非常有利於細菌和真菌的繁殖,造成汙染,影響組織培養的成功。因此,培養基的消毒是必不可少的環節。壹般采用高溫高壓消毒和過濾消毒。
高溫高壓消毒:壹般用消毒鍋消毒。首先,將裝有培養基的培養器皿放入消毒籃,然後放入裝有水的消毒鍋。註意容器不能裝得太滿,以免影響鍋內蒸汽循環。安裝後,擰緊蓋子,加熱,打開氣閥。水開後放氣3-5分鐘排出鍋內冷空氣,然後關閉排氣閥繼續加熱,使鍋內壓力和溫度保持在108 kPa約120℃約15-20分鐘。
過濾和消毒:壹些容易被高溫破壞的培養基成分,如吲哚乙酸(IAA)、吲哚丁酸(IBA)、玉米素(ZT)等,不適合高溫高壓消毒,可在過濾和消毒後加入高溫高壓滅菌的培養基中。直徑較大的細菌可用細菌過濾消毒器過濾,過濾消毒應在無菌室或超凈工作臺中進行。