壹、植物組織蛋白質的提取方法
1、根據樣品的重量（1g樣品加入3.5ml提取液，可根據材料不同適當添加），在冰上配制提取液。
2、將樣品放入研缽中用液氮研碎，研碎後加入提取液中，在冰上靜置（3-4 小時）。
3、用離心機 8000rpm40min4℃ 或 11100rpm20min4℃ 離心
4、提取上清液，樣品制備完成。
蛋白提取液：300ml
1、1Mtris-HCl（PH8）45ml
2、甘油（Glycerol）75ml
3、聚乙烯基聚吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g
本方法針對 SDS-PAGE、垂直平板電泳！
二、植物組織蛋白質提取方法
氯乙酸-丙酮沈澱法
1、將葉片在液氮中研磨
2、加入3倍體積的樣品在-20℃下提取過夜，然後離心（4℃以上8000轉/分1小時）棄上清液。
3、加入等體積的冰浴丙酮（含0.07%的β-巰基乙醇），搖勻，然後離心（4℃8000rpm以上1小時），再真空幹燥沈澱，備用。
4、取樣前加入裂解液，室溫放置 30 分鐘，使蛋白質充分溶於裂解液中，然後離心（15℃ 8000rpm 以上 1 小時以上，以無沈澱為標準），可暫存 4℃待用。
5.用 Brandford 法定量，然後分裝到-80℃備用。
藥品：提取液：丙酮，含 10%三氯乙酸和 0.07%β-巰基乙醇。裂解液：將 2.7g 尿素 0.2g CHAPS 溶於 3ml 滅菌去離子水中（最終體積為 5ml），然後加入 1M DTT 65ul/ml 後使用。
這種方法適用於雙向電泳，雜質較少，離子濃度較小！當然單向電泳也適用，只是電泳條帶會減少！
三、組織：腸粘膜
目的：WESTERN BLOT檢測細胞雕亡相關蛋白的表達
應用TRIPURE提取蛋白步驟：
含蛋白上清液加入異丙醇：（每1ml加入1.5ml TRIPURE用量）
倒置混勻，室溫放置10min
離心：12000 g，10 分鐘，4 攝氏度，棄上清液
加入 0.3M 鹽酸胍/95% 乙醇：（每 1 毫升 TRIPURE 加入 2 毫升）
搖勻，室溫放置 20 分鐘
離心：7500g, 5 分鐘，4 攝氏度，棄上清液
重復 0.3M 鹽酸胍/95%乙醇步驟 2 次
沈澱中加入 100% 乙醇 2 毫升
充分搖勻，室溫放置 20 分鐘
離心：7500g，5 分鐘，4 攝氏度，棄上清液，吹幹沈澱
1%SDS溶解沈澱
離心：10000g，10 分鐘，4 攝氏度
離心：10,000g, 10 分鐘，4 攝氏度
沈澱用 1% SDS 溶解。
取上清液，-20 度保存（也可直接用於 WESTERN BLOT）
問題：加入 1% SDS 後，沈澱沒有溶解，還是壹大塊，4 度離心後，白色沈澱多了，SDS 結晶了？測濃度，含量只有1mg/ml左右。
解決方法：提蛋白試劑盒，除組織大小合適外，待破碎後，立即加入2X BUFFER，再煮5-10分鐘，效果很好。
四、植物材料：水稻秧苗、葉鞘、根
1、取200mg樣品置於冰上研磨
2、加入裂解緩沖液，離心，10000轉/分，4度，5min取上清液
3、重復離心5min
裂解緩沖液：尿素np -40 ampholine 2-me pvp-40
五、蛋白質樣品制備蛋白樣品制備
按照 Davermal 等人（1986 年）的方法提取幼苗蛋白樣品。
將 100 毫克材料剪碎，加入 10 毫克 PVP-40（聚乙烯吡咯烷酮）和少量石英砂，用液氮研磨成粉末，再加入 1.5 毫升 10%三氯乙酸（丙酮制劑，含 10 毫摩爾，即：0.07%β-mera）和 0.07%β-mera-1（聚乙烯吡咯烷酮）、加入 1.5 毫升 10%三氯乙酸（丙酮制劑，含 10 毫摩爾，即 0.07%β-巰基乙醇），攪拌，在 -20°C 下沈澱 1 小時，在 4°C 下以 15000 轉/分離心 15 分鐘，棄上清液。將沈澱重新溶解於 1.5 ml 冷丙酮（含 10 mM β-巰基乙醇）中，然後在-20℃下沈澱 1 小時，同上離心，棄上清液，（必須使用低溫冷凍和真空幹燥得到的 80%丙酮（含 10 mM β-巰基乙醇）沈澱）。
每毫克幹粉加入 20 微升（可調）UKS 溶液[9.5 M 尿素、5 mM 碳酸鉀、1.25% SDS、0.5% DTT（二硫蘇糖醇）、2% Ampholine（Amersham Pharmacia Biotech Inc，pH 3.5-10）、6% Triton X-100]。溶液應在 37℃下孵育 30 分鐘，孵育期間多次攪拌，然後在 28℃（溫度低，尿素濃度高會使溶液結冰）下以 16000 r/min 離心 15 分鐘，離心力越大，時間越長越好！上清液可取樣電泳。或零下 70 度保存
六、植物根中蛋白質的提取
（1）取樣，液氮研磨
（2）裝入 1．5 ml離心機用離心管
（3）加入1M KH2PO4 K2HPO4 700 ul
（4）12000轉/分，4度，10-15minite
（4）12000轉/分，4度，10-15minite
（5）1．, 10-15minite
（5）取上層液體，蛋白質在裏面
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