中藥第42卷12號2011年65438+2月。
銀杏葉滴丸中萜內酯含量測定方法的改進研究
黃，李，*
浙江省食品藥品檢驗所，浙江杭州310004。
目的建立銀杏葉滴丸中萜內酯的含量測定方法。方法采用高效液相色譜-ELSD法。流動相為甲醇-水(30∶70)，體積流速為0.8 mL/min。ELSD檢測器和漂移柱為diamon sil c 18(150mm×4.6mm，5微米)。
管溫為105℃，氮氣體積流量為3.0 L/min。結果銀杏內酯A、銀杏內酯B、銀杏內酯C和白果內酯的含量分別為1 672.2 ~ 1033.2、1 026.4 ~ 6 158.4、527.8 ~ 3 166.8和2 200.8。銀杏內酯A、銀杏內酯B、銀杏內酯C、銀杏內酯和總萜內酯的平均回收率分別為100.3%(RSD 2.5%)、108.1%(RSD 3.5%)和116.0%(RSD 4.5%)。結論該方法簡便、可控、重現性好，可用於銀杏葉滴丸中萜內酯的定量測定，為中成藥中多指標成分的同時測定提供了有效的思路和解決方案。
關鍵詞:銀杏葉滴丸；萜內酯；銀杏葉提取物；銀杏內酯a；銀杏內酯b；銀杏內酯c；白果內酯中文分類號:R286.02文獻識別碼:A文號:0253-2670(2011)12-2456-03。
銀杏葉滴丸中萜內酯含量測定方法的改進
魏，李映紅，
浙江省食品藥品檢驗所，杭州310004
關鍵詞:銀杏葉滴丸；萜內酯；銀杏葉提取物；銀杏內酯A；銀杏內酯B；銀杏內酯C；銀杏內酯
銀杏葉滴丸是銀杏葉提取物的新制劑，具有活血化瘀、通絡的作用，用於血瘀引起的胸痹、心痛、中風、半身不遂、舌強、冠心病穩定型心絞痛、腦梗塞[1]。目前銀杏葉滴丸由浙江萬邦制藥有限公司獨家生產，標準載於《中國藥典》(2010版)。萜內酯是銀杏葉提取物的活性成分之壹[3]。銀杏萜內酯能高選擇性地拮抗PAF誘導的血小板聚集，其中銀杏內酯B作用最強，從而降低血液粘度，防止組織器官缺血缺氧[4]。銀杏萜內酯的測定通常采用HPLC-ELSD法，以銀杏內酯A、銀杏內酯B、銀杏內酯C和銀杏內酯為對照[2，5-7]，統計這四種對照的總量。為了簡化操作，節約資源，本實驗以銀杏葉提取物為對照進行方法學考察，並對原標準進行優化。1儀器和材料
安捷倫1200系列高效液相色譜儀(美國安捷倫公司):包括G1311A四元泵和G1322A脫氣。
收到日期:2011-07-12
基金項目:國家“十壹五”科技支撐計劃(2009ZX09308-004)
作者簡介:黃(1983-)，女，浙江溫州人，碩士，主要從事藥品質量分析工作。
電話:[1**********]傳真:(0571)86459425電子郵件:衛青-h@163.com
*通訊員鄭成電話:(0571) 86459414郵箱:Joe FF30 @ 163.com。
機、G1329A自動進樣器、G1316A柱溫箱、Alltech 2000ES蒸發光散射檢測器。
銀杏內酯(BB，批號110965-200404)、銀杏內酯A (GA，批號110862-200608)、銀杏內酯B (GB，批號110868)。銀杏葉對照提取物(批號091004)由浙江康恩貝藥業有限公司提供(標準化，含GA 26.78 mg/g，GB 16.44 mg/g，GC 8.45 mg/g，BB 35.25 mg/g)。乙酸乙酯、乙酸鈉和鹽酸為分析純；甲醇是色譜純的，水是重蒸餾水。銀杏葉滴丸(批號100310、100311、100312、100209、1004065438+)方法和結果2.1色譜條件
色譜柱為Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm，5微米)，流動相為甲醇-水(30∶70)，體積流量。
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0.8 mL/min，ELSD檢測器，漂移管溫度65438±005℃，氮氣體積流量3.0 L/min。根據BB峰計算理論塔板數。
1
1
不低於2500；GA峰和GB峰的分離度大於1.5。色譜圖見圖1。
壹個B
1
三
2
四
三
2
四
C
三
2
四
t / min
1-BB 2-GC 3-GA 4-GB
0 10 20 30 0 10 20 30 0 10 20 30
圖1銀杏葉對照提取物(a)、銀杏葉滴丸(b)和混合對照品(c)的HPLC圖譜圖1銀杏葉提取物對照(a)、銀杏葉滴丸(b)的HPLC色譜圖，
和混合參考物質(C)
2.2混合參考溶液的制備
527.8 ~ 3 166.8，2 200.8 ~ 13 204.8 ng呈良好的對數線性關系。2.6精度檢驗
準確吸取10 μL上述對照提取液，重復進樣5次，記錄峰面積。GA、GB、GC和BB峰面積的RSD分別為0.2%、0.4%、0.5%和0.1%，表明儀器精密度良好。2.7穩定性測試
取批號為100310的樣品制備供試品溶液，分別在0、4、10、16、24和30 h註入色譜儀，記錄GA、GB、GC和BB的峰面積。結果表明，GA、GB、GC和BB峰面積的相對標準偏差分別為0.5%。2.8再現性測試
取批號為100310的* * 6樣品約0.5 g，照試液制備方法操作，註入液相色譜儀，依法測定。總萜內酯的相對標準偏差為2.3%，GA、GB、GC和BB的相對標準偏差分別為2.4%、3.0%、2.8%和6544。2.9樣品回收試驗
按供試品溶液的制備方法，分別取同批樣品(批號100310)約0.25 g和* * 6份，加入約0.1 g標準化銀杏葉提取物，註入液相色譜儀，依法測定，計算回收率和RSD。結果表明，GA、GB、GC、BB和萜內酯的平均回收率分別為100.3%、108.1%、116.0%、90.4%和99.3%，相對標準偏差分別為2.5%和99.3%。2.10樣品測定
取6批樣品，每批約0.5 g，照供試品溶液的制備方法操作，註入液相色譜儀，依法測定。參考中國醫學。
準確稱取GA、GB、GC、BB分別為22.47 mg、18.97 mg、10.25 mg、19.60 mg，置於20 mL量瓶中，加入甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，即得混合對照溶液。2.3測試溶液的制備
取銀杏葉20片，研細，混勻，取0.5 g，準確稱取，置於帶塞錐形瓶中，加入20 mL水、4滴2%鹽酸溶液和20 mL乙酸乙酯，加熱回流30min；；冷卻至室溫，轉移至分液漏鬥，分離乙酸乙酯溶液，用乙酸乙酯萃取水溶液三次，每次20 mL，合並乙酸乙酯溶液，用5%乙酸鈉溶液萃取20 mL，分離乙酸鈉溶液，用乙酸乙酯萃取20 mL，合並乙酸乙酯溶液，用水洗滌兩次，每次10 mL，分離水溶液，用乙酸乙酯萃取20 mL，合並。
2.4對照提取液的制備
取標準化銀杏葉對照提取物0.15 g，準確稱取，按供試品溶液的制備方法，制備對照提取液。
2.5線性關系調查
準確吸取上述對照提取液2、4、6、8、10、12 μL，分別註入高效液相色譜儀，以進樣量的對數值為橫坐標(X)，以峰面積的對數值為縱坐標(Y)，進行線性回歸，得到回歸方程:Gay = 1.249X-2。GB Y = 1.421.6 X-4.629 1，r = 0.999 4；GC Y =1.646 2 X -3.687 3，r = 0.9996；BB Y = r = 0.999 4；顯示GA，GB，GC，1.257 4x-1.986 1，
BB範圍從1 672.2到1033.2，1 026.4到6 158.4，
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[1]佳能萜烯內酯的量基於GA、GB、GC和BB的總量。
研究了漂移管溫度和氮氣體積流量。結果表明，漂移管溫度為105℃，氮氣體積流量為3.0 L/min時，響應值最大。
同時，用常規混合參比法測定了六批樣品中總萜內酯的含量。通過比較，兩種方法的相對平均偏差分別為0.9%，0.8%，0.4%，65438±0.3%，0.0%和65438±0.2%。
為了使標準更加科學和簡單，萜內酯的結果見表1。
表1銀杏葉滴丸中總萜內酯的定量測定結果(n = 2)
表1萜烯內酯的測定
銀杏葉滴丸(n = 2)
批號
總萜內酯/(毫克丸？1)
銀杏葉對照提取方法
混合參考方法
100310 1.11 1.09 100311 1.17 1.19 100312 1.23 1.2 4 100209 1.20 1.17 100401 1.20 1.20
100402 1.25
1.28
3討論
根據《中國藥典》2010版[1]“加水10 mL，用溫水溶解”，發現部分殘渣不能完全溶解，故本實驗對供試品溶液的提取條件進行了考察。結果表明，20 mL，...，加入20 mL乙酸乙酯，回流30 min”即可解決。
在本實驗中，比較了正丙醇-四氫呋喃-水
[4-6]
和甲醇-
在水[8-9]流動相體系中，發現4種銀杏內酯在兩種體系下均可在30 min內達到基線分離。考慮到正丙醇和四氫呋喃都是不常用的試劑，尤其是四氫呋喃有很強的毒性和刺激性，流動相為甲醇-水(30∶70)。
本實驗考察了柱溫為25℃、30℃和40℃時色譜峰的分離效果，結果表明，所有色譜峰均能得到有效分離。還研究了Diamonsil C18色譜柱(150毫米×4.6毫米，5微米)、安捷倫Eclipse XDB-C18色譜柱(150毫米×4.6毫米，5微米)和Kromasil 100-5 c 18 c 65438+。
本實驗對蒸發光散射檢測器的參數進行了優化
改進了液相色譜的預處理方法和流動相系統。為了節省對照品和化學試劑的用量，采用銀杏葉提取物進行定量，為中成藥多指標同時測定提供了有效的思路和解決方案，節省了中藥對照品，減少了健康。
實際檢驗成本低，好處大。參考
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體積19.5438+0998。
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“加水(