先制備感受態細胞，然後用電擊或熱激轉化。
有制備感覺細胞的方法:方法1:
細菌轉化的方法大多基於Mendel和Higa(1970)的發現。基本方法是用冰預冷的CaCl2 _ 2或多種二價陽離子處理細菌，使其進入感受態而被轉化。
用CaCl2 _ 2制備大腸桿菌的新鮮或冷凍感受態細胞常被用於批量制備感受態細菌。該方法適用於大多數大腸桿菌菌株，且快速、重現性好。操作過程簡述如下。
1.從37℃培養的新鮮平板上挑取單菌落(如大腸桿菌DH52)或16 ~ 20 h的1ml新鮮過夜培養物，轉移到含100mlLB培養基的1L或500ml中。在37℃下劇烈振蕩培養約2 ~ 3小時(200 ~ 300 r/min轉臺式)，每隔20 ~ 30 min測壹次OD600值≈0.4。
2.無菌條件下，將細菌轉移至用冰預冷的50ml聚丙烯離心管中，置於冰上10 ~ 20min。
3.用SorvallGS2轉子(或與其離心管匹配的轉子)在4℃下以4000轉/分鐘離心10分鐘以回收細胞。
4.倒數培養液，倒置試管65438±0分鐘，使最後殘留的微量培養液耗盡。
5.用10ml用冰預冷的0.1mMCaCl2懸浮每個沈澱物，並將其置於冰上。
6.用SorvallGS3轉子(或其相應的轉子)在4℃以4000轉/分鐘離心10分鐘以回收細胞。
7.倒出培養液，將試管倒置65438±0分鐘，使最後殘留的微量培養液流盡。
8.每50毫升初始培養物用2毫升用冰預冷的0.1M CaCl2 _ 2重懸。此時，細胞可以迅速分裂成小份，冷凍在液氮中，保存在-70℃備用。
9.用冷卻的無菌吸頭從每個感受態細胞懸液中取出200μl，轉移到無菌微量離心管中，向每個管中加入DNA或連接反應混合物(體積≤10μl，DNA≤50ng)，輕輕旋轉使內容物混合均勻，並置於冰中30分鐘。
10.將離心管放在試管架上，放入預熱到40℃的循環水浴中90秒~ 2分鐘，不要搖動試管。
11.迅速將試管轉移到冰浴中，讓細胞冷卻1 ~ 2分鐘。
12.在每個離心管中加入800μlSOC培養基，水浴加熱培養基至37℃，然後將試管轉移至37℃的搖床中，孵育45分鐘以復活細菌，並表達質粒編碼的抗生素抗性標記基因。
13.將適當體積(每90mm平板最多200μl)的轉化感受態細胞轉移至含有200mmol/l硫酸鎂和相應抗生素的SOB培養基中。
14.將盤子放在室溫下，直到液體被吸收。
15.倒置平板，37℃培養，12 ~ 16h後可出現菌落。
方法二:
Cas超級壹步競爭細胞Preps試劑盒采用壹種簡便的方法處理大腸桿菌，使其成為感受態細胞，便於質粒DNA轉化，可以滿足壹般實驗的要求。與CaCl2 _ 2法相比，它有許多優點:使用方便，只需壹步即可完成感受態細胞的制備；轉化效率略高於CaCl2 _ 2法，壹般可達106-108cfu/μg，滿足壹般實驗的需要。感受態細胞制成後可在-70℃保存，不加甘油，長期保存後其活力無明顯下降。
準備工作:
1.從液氮或低溫冰箱中取出的冷凍大腸桿菌菌在LB平板上交叉，熬過壹夜需要37天。
單菌落。挑取兩個形態完整的單菌落，分別接種於37℃和250rpm的5ml LB培養基中。
過夜培養。
2.第二天，從5ml LB培養物中吸取200μl，轉移到50ml LB培養基(250ml錐形瓶)中，37。
在250轉/分鐘的溫度下培養2小時，此時OD600約為0.4-0.5。
感受態細胞的制備；
3.吸取1ml菌液於1.5ml離心管中，以5000rpm離心5分鐘，棄去上清液。
4.加入100μl預冷溶液A，懸浮細菌，冰浴30分鐘。
5.此時，感受態細胞已準備好立即使用或保存在-70℃下。
細胞轉化:
6.將100pg-10ngDNA加入感受態細胞中，混勻，冰浴30分鐘，然後42℃加熱1分鐘。
打，再冰浴2分鐘。加入0.9ml LB培養基，20μl溶液B，37℃搖勻。
培養1小時。
7.取適量菌液(100-200μl)塗於相應電阻的平板上。
8.過夜培養約16小時，計數菌落，計算轉化率。
補充說明:
1.使用的儀器必須幹凈；
2.操作步驟2中培養基的裝載量也很重要，建議裝載量不要高於這個值:500ml錐。
瓶裝100ml培養基，250ml錐形瓶50ml培養基；
3.可在收菌前半小時在培養基中加入20mM MgCl2，效果會更好；
4.為保證細胞處於對數生長期，培養細胞的od值不應高於0.6；
5.制備感受態細胞時，所有操作應盡可能在冰上進行；
6.細胞轉化操作第六步，冰浴後可直接加入新鮮LB，無需熱激，簡化了操作。
Step，但轉換效率低於熱沖擊法，適用於轉換要求不高的實驗。
方法三:
1.取1%大腸桿菌接種於含2ml LB培養基的試管中，37℃搖勻過夜。
2.將0.1毫升過夜培養物轉移至裝有10毫升LB培養基的三角瓶中，在37℃下振蕩培養3小時，直至OD600=0.3。
3.然後將培養物倒入65438±0.5ml離心管中，冰浴65438±00分鐘。
4.在4℃和4000rpm下離心5min，去除上清液。
5.將菌體懸浮於151冰冷的0.1M CaCl2溶液中，置於冰上30分鐘。
6.然後在4℃和4000rpm離心65438±00分鐘，去除上清液。
7.將菌體懸浮在0.1毫升CaCl2溶液中，置於冰浴中4-12小時。
方法4:
(1)將過夜培養的細菌(如DH52、TG1、TM101)接種於100ml2×YT燒瓶中。在37℃劇烈震蕩時，≥200rpm培養的細菌密度約為OD 550 = 0.2 ~ 0.5 (5× 107個細胞/ml)，耗時2 ~ 4小時。
(2)冰上冷藏培養物65438±00分鐘，4℃離心細菌培養物，65438±00000轉/分鐘離心65438±00分鐘。
(3)棄去上清液，將細菌懸浮於50mMCaCl2和10mm Tris？無菌冷凍液中的HCl(pH8.0)。
(4)將細菌在冰上懸浮約5min，然後將懸浮液在4℃離心10000/rpm 10min。
(5)棄去上清液，將細菌懸浮於原培養體積的50mMCaCl和15中。HCl(pH8.0)處於無菌冷凍狀態。此時，細胞為感受態細胞，可用於轉化。200μl分裝於無菌1.5ml微量離心管中，保存於-80℃冰箱中。
方法五:TSB法(也是我最喜歡的方法)
1.藥物制備
1M Mg2+ (1M MgSO4和1M MgCl2等體積混合)，0.22um濾膜超濾滅菌。
TSB溶液(30毫升/80毫升細菌溶液)(現可使用):
PEG3350 3g
胰蛋白腖0.3g
酵母提取物0.15g
氯化鈉0.3克
在1210c和15分鐘滅菌後，加入1M Mg2+600uL和3ml DMSO。
2.步驟:
(1)活化菌株
(2)單菌落在5mL液體培養基中培養。
(3)取50uL液體培養物，在80mL液體培養基中進行擴大培養。
(4)370℃培養3-4小時，OD600為0.4-0.6。
(5)離心，去除上清液。
(6)加入20mLTSB並重新懸浮。
(7)離心，去除上清液。
(8)加入10mLTSB，然後加入15-20%甘油，包裝儲存。
註意:整個操作過程要在冰上進行。所有使用的藥物都必須消毒。
轉換程序
（
1)取出200μl感受態細胞緩慢溶解，立即置於冰上，加入DNA或連接反應混合物，DNA的量通常≤50mg。用手指敲打試管10次使其混合均勻，然後放在冰上40 ~ 45 min。
(2)將試管放入42℃水浴中2分鐘。
(3)然後直接在每個試管中加入1.0ml2×YT培養基，倒置混勻，37℃培養8 ~ 12h，幹浴或水浴，不振蕩。在此期間，細菌生長並開始分泌抗生素。
(4)在6個2×YT瓊脂培養板中，每200μl轉化液添加相應的抗生素，轉化液中含有X-gal(20mg/ml)和IPTG(200mg/ml)。
(5)平皿攤幹菌液後，將平皿倒置，置於30 ~ 37℃培養箱中18 ~ 22h。克隆體應該在這期間出現，否則轉化不會成功。
除上述方法外，還有許多制備大腸桿菌感受態細胞的常用方法。每種方法都有自己的優缺點，我們應該根據自己的實驗條件來選擇方法。以便獲得最高的轉換效率。