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探究酵母菌種群數量變化實驗

探究酵母菌種群數量變化實驗如下:

酵母菌是常用於釀酒和面食膨化的食品工程菌。在進入壹個新的培養環境後,酵母菌種群數量的變化會遵循什麽樣的規律呢?此次的實驗我們通過用血細胞計數板估算培養液中酵母菌的種群密度,計算得出種群數量,探究7天內培養液中酵母菌種群數量變化的規律。

材料用具:

安琪酵母粉、土豆、蔗糖、天平、蒸餾水、50 mL錐形瓶、棉塞、500 mL燒杯、量筒、紗布、高壓蒸汽滅菌鍋、酒精燈、恒溫培養箱、冰箱、滴管、0.2%亞甲基藍溶液、血細胞計數板、顯微鏡等。

土豆培養基:100 g土豆和10 g蔗糖加水煮沸15分鐘,紗布過濾後,加水定容至500 mL。用量筒分裝到7個50 mL錐形瓶中,塞好棉塞,用舊報紙和棉線封口後,高壓蒸汽滅菌備用。

0.2%亞甲基藍溶液:0.2 g亞甲基藍粉末溶於100 mL蒸餾水。

步驟:

1.酵母菌培養。

每天對壹瓶培養基用0.25g的幹酵母粉在酒精燈旁進行等質量無菌接種,接種密度約為6×107個/mL。這樣7個培養基中的初始種群密度基本壹致。

接著將接種後的培養基放到30℃的恒溫培養箱中進行培養,七天後第壹天培養的酵母菌就培養了7天,而第七天培養的就只培養了1天(圖1)。培養結束後將所有培養基放到4℃低溫保存,在這個溫度下酵母菌即停止生長,短時間內又不會死亡。

2.培養液的稀釋與染色。

實驗前分別取1 mL搖勻的培養液加入到已經盛有48 mL蒸餾水的錐形瓶中,再加1 mL0.2%亞甲基藍水溶液,使原培養液稀釋50倍。亞甲基藍可以使死細胞染成藍色,而活細胞不會,可以幫助我們在顯微鏡下區別死活細胞。

3.使用血細胞計數板進行計數。

血細胞計數板是壹個特制的加厚載玻片,由中間“H”形的導流槽將計數板分成了兩個臺面,每個臺面上各有壹個計數室。通過在顯微鏡下對計數室中酵母菌細胞或其他細胞進行計數,可以計算出原培養液中細胞的密度。

先將特制的計數板蓋玻片蓋在計數室上,計數室和蓋玻片之間的液體高度為0.1 mm。將要計數的培養液用滴管吹打混勻後,吸取培養液從計數室和蓋玻片之間的斜面進樣。

培養液會由於毛細作用浸潤到計數室內,當培養液充滿計數室時,停止進樣。靜置壹會等細胞沈澱,就可以上鏡觀察了。

觀察之前要註意將計數室對準通光孔,把光圈關到最小。這樣更容易找到計數方格。

在4倍鏡下通過調整準焦螺旋找到中央大方格,並將其置於視野中央,再換到10倍鏡,可以看到面積為1mm2中央大方格由25個具有雙線邊框的中方格組成。

每個中方格中有16個小方格,因此壹個中央大方格中***有400個小方格,每個小方格的面積為1/400mm2,這就是計數板上25和1/400mm2的由來。

接下來用40倍鏡對中央大方格中的左上、右上、左下、右下和中間的中方格中的酵母菌細胞活細胞,進行五點取樣計數了。計數時遵循對壓線的細胞取上不取下,取左不取右的原則。

在數完5個指定的中方格中的細胞數目後,將它們相加除以5 得到每個中方格中細胞的平均數。再乘以25得到中央大方格中細胞的數量。

除以大方格中培養液的體積則得到了每立方毫米中細胞的數量。由於1 mL等於1000 mm3,因此乘以1000後得到每毫升稀釋液中細胞的數量。乘以記錄的稀釋倍數後得到每毫升原液中細胞的數量。

4. 數據處理及分析。

實驗前將班上的同學分成7個小組,每組指定壹位小組長,負責領取、分發稀釋液,在規定時間內匯總組內的數據,求出組內的平均值,對於差異大於壹個數量級的數據予以舍去,以減小誤差,然後向全班匯報。

各位同學再根據匯總的數據,繪制出七天內培養液中酵母菌種群密度變化的曲線(圖7),找出其變化規律,並運用已有的知識合理地解釋。

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