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質粒DNA電泳與基因組DNA電泳有什麽區別?

質粒DNA電泳圖與基因組DNA電泳圖的區別:

1、DNA顯色帶條數:質粒DNA電泳有3條帶;而基因組DNA應該只有壹條帶或者兩條帶。

2、應用技術:質粒DNA電泳圖與基因組DNA電泳圖都是采用了凝膠電泳技術。

質粒DNA電泳會有三條帶,最遠的是線形DNA(lDNA): 質粒的兩條鏈均斷裂;線性分子;中間的是開環DNA(ocDNA): 質粒的壹條鏈斷裂;松弛的環狀分子;***價閉合環狀cccDNA: 質粒的兩條鏈沒有斷裂;超螺旋。質粒跑出來必須是三條帶,只要的是最前端的那條帶,既CCCDNA。

基因組DNA電泳壹般是1條帶,雖然在妳抽提過程中也會發生斷裂,形成幾十至幾百kb的大片段。但是我們壹般用1%的膠,無法區分不同大小的DNA,所以看起來像是壹條帶。如果配成0.6%的膠再加lamda hindIII marker,適當延長跑膠時間,就應該會出現幾條帶了。

電泳的遷移率,取決於核酸分子本身的大小和構型,分子量較小的DNA分子比分子量較大的DNA分子遷移要快些。這就是應用凝膠電泳技術分離DNA片段的基本原理。

擴展資料:

DNA電泳技術分離時影響其遷移速率的因素:

1、DNA的分子大小。線狀雙鏈DNA分子在壹定濃度瓊脂糖凝膠中的遷移速率與DNA分子量對數成反比,分子越大則所受阻力越大,也越難於在凝膠孔隙中蠕行,因而遷移得越慢。

2、瓊脂糖濃度。壹個給定大小的線狀DNA分子,其遷移速度在不同濃度的瓊脂糖凝膠中各不相同。DNA電泳遷移率的對數與凝膠濃度成線性關系。凝膠濃度的選擇取決於DNA分子的大小。

3、DNA分子的構象。DNA分子處於不同構象時,它在電場中移動距離不僅和分子量有關,還和它本身構象有關。相同分子量的線狀、開環和超螺旋DNA在瓊脂糖凝膠中移動速度是不壹樣的,超螺旋DNA移動最快,而開環雙鏈DNA移動最慢。

4、電源電壓。在低電壓時,線狀DNA片段的遷移速率與所加電壓成正比。但是隨著電場強度的增加,不同分子量的DNA片段的遷移率將以不同的幅度增長,片段越大,因場強升高引起的遷移率升高幅度也越大。要使大於2kb的DNA片段有效分離所加電壓不得超過5V/cm。

5、嵌入染料的存在。熒光染料溴化乙啶用於檢測瓊脂糖凝膠中的DNA,染料會嵌入到堆積的堿基對之間並拉長線狀和帶缺口的環狀DNA,使其剛性更強,還會使線狀DNA遷移率降低15%。

6、離子強度影響。電泳緩沖液的組成及其離子強度影響DNA的電泳遷移率。在沒有離子存在時(如誤用蒸餾水配制凝膠),電導率最小,DNA幾乎不移動,在高離子強度的緩沖液中(如誤加10×電泳緩沖液),則電導很高並明顯產熱,嚴重時會引起凝膠熔化或DNA變性。?

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