壹、冬蟲夏草及其寄主昆蟲的藥用歷史和發展現狀
藥用冬蟲夏草，最早的文字見於清代王安《本草綱目》(1694):“冬蟲夏草味甘，能護肺腎，止血化痰，止勞止咳。四川嘉定產的最好。冬天在土裏，形如老蠶，毛動，夏天毛出土，化為草。不吃的話，冬天會變成蟲子。後來趙學敏的《本草綱目》(1756)記載:“冬蟲夏草與人參同功，可治諸虛損”，書中還詳細描述了冬蟲夏草的產地、食用方法和用量。在1757年吳續的《本草》壹書中也指出:“冬蟲夏草護肺腎，止血化痰。“後來的《千囊》、《文獻考證》、《四川通誌》、《本草》等數百種中醫古籍都有記載冬蟲夏草。
中國將冬蟲夏草作為藥材出口到外國的歷史比文字記載的還要長。從明朝中期開始，在1400-1465年期間從浙江傳到日本，被貴族廣泛食用。1723年，歐洲傳教士讓-加特利·茨庫(Jean-Gartley Tzku)將從中國西北采集的蟲草帶到法國，列奧謬爾在法國科學院學士會議上介紹了這種蟲草，並列入會議紀要。1943年，伯克利鑒定中國冬蟲夏草，正式命名為中國冬蟲夏草；1878年被薩克多歸類為蟲草。冬蟲夏草的研究在國外引起了關註，中國的冬蟲夏草也開始聞名於世。
冬蟲夏草因僅分布於中國而享有很高的聲譽，數百年來被中國和亞洲人民視為可與天然人參、鹿茸相媲美的珍貴滋補中藥材。它具有溫和的藥用效果，比其他種類的滋補品更廣泛地用於醫藥和食品。在我國早已是藥食同源的高級滋補品，壹年四季皆可食用。老幼病殘體弱者皆宜，無任何副作用。70多部古代中醫文獻對冬蟲夏草的作用總結如下:“能補陰陽，治勞咳，各種虛損；它的優點與人參、鹿茸相同，但它的性質溫和，適用於所有年齡的體弱多病的人...“建國以來，我國有200多種藥書詳細記載了冬蟲夏草的功效和用途。《中華人民共和國藥典》記載其功能為“補肺腎，止血化痰”。可用於慢性咳喘、咳嗽咯血、陽痿遺精、腰膝酸軟。”隨著國內外醫學的發展和中醫藥在世界範圍內的逐漸普及，近年來人們發現冬蟲夏草的功能和作用越來越廣泛。研究證明，它具有鎮靜、止血、抗驚厥、降血壓、改善心肌缺血、抗血小板凝集、抗衰老、調節人體免疫力、抗肺癌、淋巴瘤、肝癌等作用。目前已越來越受到國內外藥學和生物領域研究人員的關註，相關研究報告大幅增加。
我國最早對青藏高原蝠蛾屬的分布進行科學描述和公開發表的是Poujade1886，是壹種蝙蝠蛾；，是在四川省寶興縣的雪山上發現的。後來，Alpharaky和Staudinger等學者分別於1889和1895在西藏發現了兩個物種，即:星雲H.nebulosus(諧音:H.luteus)和H.varians。1909年，Oberthur在法國Armorica半島整理從中國西藏和四川帶來的藥材和植物標本，發現壹種成年蝙蝠蛾，以半島的名稱命名為H.armoricanus。但新物種發表時解釋說，這種蝙蝠蛾的起源可能是中國的川藏高原，因為在半島上還沒有發現。後來，直到1959年，中國科學院動物研究所的研究人員在四川康定采集到大量的蝠蛾成蟲和幼蟲，經朱鴻福鑒定，與在法國阿馬裏卡半島發現的蝠蛾屬為同壹物種，因此命名為蝠蛾蟲草，並確定為我國特產冬蟲夏草的寄主昆蟲之壹。到目前為止，在青藏高原及其邊緣地區發現了37種中國特有的冬蟲夏草寄主昆蟲。
二、冬蟲夏草和蝠蛾人工栽培及產業化現狀
(壹)人工培育有性冬蟲夏草的現狀
20年來，60多個科研單位、數千人在人工栽培冬蟲夏草方面進行了大量的研究、實驗和探索。雲南、四川等地在高海拔地區小面積培育有性類型取得了成功經驗，但由於周期長、推廣對象少、投資大、收益低於高海拔地區自然采集等諸多因素，壹直沒有大面積推廣。在雲南、四川、浙江、甘肅、青海、北京、福建、廣東、貴州、廣西等省(市、區)的中低海拔地區，人工培育有性冬蟲夏草的研究也開展了多年，雖然其中不少在某些方面取得了非常可喜的成果，如雲南、四川兩省在昆明、成都、重慶等地成功繁殖了蛾類昆蟲。在浙江等地，蝙蝠蛾類昆蟲已在室內繁殖成功；但由於沒有解決蟲菌接種和子體批量、重復生長的困難，不能稱之為成功培養。離低海拔小面積、小批量、多次人工培育有性冬蟲夏草的目標還很遠。雖然有幾家公司宣稱已經成功在中低海拔批量培育出有性冬蟲夏草，但實際上科學可信度極低。因為:
(1)目前還沒有人能夠長期穩定地分離培養出正宗的蟲草真菌(即在培養基上反復長出大量的子座)。在青海、雲南、四川、北京等地栽培了基質，但其子囊孢子很少或沒有，生長不穩定，並不代表掌握了中低海拔有性人工栽培技術。
(2)冬蟲夏草的人工無性培養技術相對容易掌握，在室內接種蝠蛾幼蟲即可感染進入僵期，但完成有性形態並長出子座和子囊孢子的情況少見。
(3)除了海拔、氣候、土壤、氣壓等環境因素外，細菌之間是否存在多菌感染？如果是復合感染，哪些細菌在起關鍵作用？它在什麽時期與冬蟲夏草壹起發揮作用？等等，問題不清楚。
因此，在中低海拔地區批量、重復培養性冬蟲夏草需要大量的研究和實驗工作。即使在高海拔地區進行大規模人工栽培冬蟲夏草，也需要進行很多技術實驗。因此，人工培育有性冬蟲夏草，要實現規模化或工業化生產，還非常艱巨和遙遠。
(2)人工培養無性冬蟲夏草的現狀
由於人工培育有性冬蟲夏草難度太大，近10年來，大部分開展人工培育冬蟲夏草的單位和科研人員都轉向了無性的研究和應用。由於冬蟲夏草的無性培養技術容易掌握，而且從自然界采集的冬蟲夏草中分離的真菌大多具有與冬蟲夏草有性成分相似的理化性質和藥理作用，所以各地都把自行分離的真菌確定為冬蟲夏草的無性階段，紛紛辦廠生產菌粉，進行開發應用。目前，自然界中從冬蟲夏草體內分離出的冬蟲夏草有9屬31種，其中北京、吉林、山西、上海、青海、浙江、福建、江西、廣東、雲南、貴州等40多個省(市)發現有16種。菌絲體和分生孢子的深層大規模發酵培養和固體培養作為有性冬蟲夏草的替代品，部分廠家已進入大規模工業化生產，如淩誌膠囊、金水寶膠囊、寧心寶膠囊、心肝寶、冬蟲夏草雞精、冬蟲夏草膠囊、冬蟲夏草酒、冬蟲夏草人參滋補酒等20多種產品，年產值達1000萬元至數億元。而且，由於人工繁殖周期短，產量高，菌絲體和分生組織袍作為冬蟲夏草有性替代品在未來具有很大的開發應用潛力。
三、冬蟲夏草和蝠蛾昆蟲人工栽培技術
(壹)冬蟲夏草的寄主昆蟲飼養繁殖技術進行人工栽培冬蟲夏草，必須先人工飼養大量的寄主——蝠蛾昆蟲。蝙蝠蛾壹生98%的時間在土壤中度過，只有2.5-13d成蟲生活在地面上。因此，這類昆蟲的人工飼養管理主要在土壤中進行。
1.蝙蝠蛾的餵食工具
(1)蝠蛾卵的餵食工具。有兩種方法可以飼養蝙蝠蛾卵。壹種是用直徑為15-20cm的玻璃培養皿，墊上2-3層濾紙，皿中放壹塊脫脂棉，保持濕度。每盤可以養200-500個雞蛋。這壹點劉發觀察不到，但很難掌握濕度。第二，用l0cm xX5-8cm的廣口瓶或25cm×30cm的玻璃飼養廣口瓶，放入3-5cm厚的細腐殖土，種上1-2株球根植物，將卵放入土壤表層至1cm深度的土層中。每個罐子可以餵300-1000個雞蛋。餵養時，只要保持植株不萎蔫，就可以不加濕度。這種方法孵化率高，但幼蟲對的觀察和移植困難。
(2)幼蟲的攝食工具有四種。
A.玻璃昆蟲缸:用18-25cmX30-35cm的玻璃缸，或用標本浸泡缸，放置15-25cm的土，種上幼蟲取食，將剛孵化的幼蟲移入缸內，每缸可養10-30條幼蟲。
B.地下養蟲箱:箱子壹般高30-50厘米，寬20-25厘米，厚3-5厘米。給料箱的框架用鋼筋焊接，上面的鋼筋做成提手，便於提起；寬的兩邊是3-5mm的玻璃，便於觀察昆蟲活動；底部和兩側裝有16目銅網，便於濕氣滲透。然後裝土，種植飼料植物，每箱放養20-50只幼蟲；在堅實的地面上挖壹個比飼養箱略大、略深的槽，將飼養箱放入槽內，觀察時將飼養箱提離地面，擦去外層玻璃上的泥土，以便清楚地看到幼蟲的活動情況。
C.大型蟲籠:在半自然條件下，選擇排水良好、土質疏松的場地，挖壹條長12-15m、寬2-3m、深4cm的深溝，底部和四周墊上尼龍紗布(最好用雙層，這樣昆蟲不容易出)，然後鏟掉疏松的腐殖質填滿，種上幼蟲食物，放進去供幼蟲取食，每平方米即可。這種方法有利於大規模飼養，但難以觀察。
d、裸養用各種盆:植物飼料洗凈放入盆中，幼蟲放入盆中飼養，盆口蓋壹層黑布或黑紙遮光。觀察劉發的生活史，但要註意經常更換飼料和清除糞便。
(3)蛹和成蟲的取食工具。做壹個昆蟲箱，長50cm，寬50cm，高55-60cm。底部用薄鐵板或雙層銅網密封；頂部和四周用鐵線或尼龍線包裹，前面可以做壹個活動的紗網紗門。在箱底放10-20cm的土，種植，把蛹和成蟲放在土裏。這種方法可用於密植和飼養。
2.飼養技術要點
(1)選擇土壤。土壤是蝠蛾壹生中最重要的活動場所。土壤條件是否適合昆蟲的生活，是人工飼養成活率的關鍵之壹。高寒草甸土最適合蝠蛾的生長；其次是流石灘和草甸混合土；第三種是山中褐色和深褐色的森林土壤，其他土壤對這種昆蟲不好。
(2)食物的選擇。幼蟲喜食珠芽蓼、珠芽蓼、黃芪、大黃的嫩根和嫩芽。因為蝠蛾屬雜食性昆蟲，禾本科(如青稞、小麥、稻芽等。)可以用在沒有這種植物的地方。十字花科和莎草科植物的嫩根育種。在中低海拔地區(適宜生活的溫度)，飼餵大黃、胡蘿蔔、蘿蔔、紅薯(甘薯)、馬鈴薯、蘋果等也能正常生長。，而且最好用大黃、胡蘿蔔、紅薯。
(3)溫度和濕度的選擇。蝙蝠蛾是壹種耐低溫、怕高溫的昆蟲。最適合在15-19C生活成長；這種昆蟲最適合空氣濕度75%-85%，土壤含水量40%-45%。
3.管理技術
(1)成人階段。成蟲不吃任何食物，只要保持水分和適宜的溫度，就能正常存活和產卵。但蛾的棲息地與產卵量有關。成蟲更喜歡在蓼科等植物的根部產卵，以杜鵑花和蝠蛾幼蟲為食，所以最好在飛蛾交配產卵前種植幾種相關植物。另外，不能有強光。
(2)卵階段。為了正常孵化雞蛋，我們必須掌握合適的溫度和濕度。
(3)幼蟲期。由於幼蟲生長期長，壁薄，除必要的觀察、換土、換食外，必須精心飼養，盡量減少周轉。幼蟲的飼養關鍵是初孵幼期，剛孵出的幼蟲要給予足夠的細嫩、低濕度的食物；最好是篩土，以免粗糙堅硬的物體劃傷主體。另外，為了延長食物和土壤不發黴，更換前應使用紫外線燈滅菌l5min，使用前也可將土壤在陽光下暴曬1-2h。
(4)蛹期。養蛹時，先把養蛹器皿裏的土壓實，然後用蛹粗細的木棒人工建造壹個土室。土室略傾斜，深約2-3厘米，每個室內放壹只蛹。放蛹時，蛹頭朝向土面，頂部覆蓋細土。蛹的溫濕度可控制在大氣濕度的80%-85%，土壤濕度的42%-45%，18-22℃之間。
[2]冬蟲夏草人工培養技術
為了獲得冬、夏初和草的純品系，必須進行人工分離、純化、復壯和保存。
1.冬蟲夏草的分離技術和條件
(1)材料要求。獲得純菌株需要嚴格的材料；壹般來說，如果采用冬蟲夏草的組織塊分離法，最好的分離材料是每年65438+10月底至165438+10月收集的材料，此時青藏高原高寒草甸的土壤剛剛開始結冰。在這個時期，冬蟲夏草剛剛感染蛾幼蟲，進入僵死階段的時間很短，嫩子芽剛剛長出蟲頭0.2-0.5cm，蟲體內其他雜菌很少。若次年五、六月取材，僵蟲體內及亞座內生活或腐生有多種雜菌，難以獲得純菌株。如果用子囊孢子進行分離培養，最好在每年的7月中下旬，子囊孢子剛剛部分成熟的時候收集分離材料。
(2)操作方法。有三個步驟。
A.僵蟲(即菌核)分離:分離前先用水沖洗主體表面，再用無菌水沖洗2-3次；用0.65min438+0%-0.2%的氯化汞溶液對分離後的材料表面消毒約3-5分鐘；然後用無菌水清洗。選擇以胸部和腳部為邊界的前部。用手術刀切掉表皮，避開消化道，將血腔中的菌絲切成芝麻狀，壓入平板培養基中，每皿1-2粒。在15-19℃培養。當菌落長到0.2-0.5cm時，選取少量菌絲，在平板培養基上反復純化2-4次。確認無其他雜菌後，轉入試管保存培養。
b、分離子芽:將洗凈的子芽從僵蟲頂部切下，放入0.1%氯化汞溶液中消毒2-3min，用無菌水洗凈，切下中間的組織塊，壓入培養基中；培養條件與a相同。
C.子囊菌孢子分離:用透明紙袋覆蓋子囊菌孢子成熟的基質，讓子囊菌孢子彈起粘在紙袋上。然後將裝有子囊菌孢子的紙袋浸入25%葡萄糖溶液中，洗去孢子，置於15-19℃培養，每天進行鏡檢。當袍子發芽後，用微量吸管將單個孢子吸到平板上進行培養。培養條件與a相同。
或者，可以將整個成熟的冬蟲夏草帶入室內，用棉紙包裹僵蟲甚至蟲的子座，只留下孕蟲部分，在無菌室中水平放置載玻片，隨時保持主體濕度；每天鏡檢，當子囊孢子彈到載玻片上時，用微量移液器吸到培養皿的培養基中進行培養；培養條件與a相同。
(3)培養基的選擇。
A.馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基(PDA)是所有蟲草真菌的通用培養基，在分離培養初期可以使用，但菌種生長不是很旺盛，容易老化退化。
b增菌培養基(1):多能蛋白臍帶10g，葡萄糖50g，磷酸氫二鉀1g，硫酸鎂0.5g，活蠶蛹30g，生長素0.5μg，瓊脂20g，水1000mL，pH: 5.0。
富集培養基(ⅱ):保藏蛋白40g、葡萄糖40g、去皮鮮馬鈴薯100g、磷酸氫二鉀1g、硫酸鎂0.5g、牛肉醬10g、生長素0.5μg、蝠蛾活幼蟲(粉)30g、瓊脂20g、高山草甸土浸出液1000ml等。
在強化培養基上，菌落比在PDA培養基上生長得更旺盛、更迅速。加福ⅱ優於ⅰ。
2.生長特性在冬蟲夏草的分離培養中，需要掌握對溫度、pH值、光照、碳氮源和無機鹽的利用。
(1)不同溫度對菌絲生長的影響。冬蟲夏草喜歡低溫。在0-4℃能緩慢生長；5-8℃時生長速度加快；10-19℃是該菌株的適宜生長發育範圍；最適生長溫度為15-19℃。當溫度超過20℃時，菌絲生長迅速，菌落由白色變為灰黑色或棕黃色，並開始變異，因此不適合高溫培養。
(2)對pH值的要求。冬蟲夏草是壹種酸性真菌，最適pH值為5.0-6.0。pH值在4.5以下，6以上時，會隨著增減而緩慢增長或不增長。
(3)光線的影響。該菌株在子囊孢子萌發和菌絲生長的前期適應弱光和短光，後期適應強光。在人工培養中，菌絲、分生孢子和基質具有明顯的趨光性，在向陽面生長密集，背光面生長稀疏，在全黑環境中培養的各種細菌細膩、細長、稀疏。
(4)碳源的利用。冬蟲夏草可以利用多種碳源，但葡萄糖和麥芽糖壹起使用時生長最快，單獨使用葡萄糖時也能生長良好，其次是馬鈴薯、蔗糖等澱粉。
冬蟲夏草是壹種從寄生生活宿主生長到腐生階段的真菌，因此可以很好地利用各種有機氮源。而活蟲是最好的；蛋白腖和酵母膏混合使用對生長也非常理想，其次是各自單獨使用，再其次是牛肉醬等等。而硫酸銨、硝酸鉀等無機氮的利用率較差。
對灰分養分有壹定需求，在含微量硫酸鎂和磷酸氫二鉀的培養基中生長旺盛，其次是磷酸二氫鉀，也可使用鈉、鈣、鐵、銅等其他無機鹽。
3.培養方法經過分離純化，冬蟲夏草可以作為各種實驗和擴大生產應用。
(1)擴大其產量通常有三種方法:固體靜置培養、搖瓶培養和大罐曝氣發酵培養。
A.靜態培養:主要用於固體培養，如管斜面、三角瓶培養、水稻培養等。在靜態培養中，只要掌握好溫度和光照，細菌就能正常生長。斜面上的分生孢子成熟後，可在1-2℃冰箱中保存8-14個月，也可直接作為種子用於生產。
B.振蕩培養:液體培養和小規模繁殖培養均可。搖動培養基，從固體培養基中減去瓊脂。最好選擇恒溫振蕩培養機，將液體培養基放入三角瓶中，接種試管固體菌種進行培養。經過連續振蕩，液體培養基中的各組分混合均勻，無沈澱，同時促進氣液接觸交換，使氧氣進入液體培養基，有利於菌絲生長和分生孢子形成。
C.大罐通氣發酵培養:大規模生產菌絲體、分生孢子等菌粉時，必須使用大罐通氣發酵培養。在這種方法中，通過抽吸或真空泵減壓進行曝氣，並通過過濾器去除細菌，然後將其送入罐中的液體培養基中，用於冬蟲夏草的生長和發育。
(2)發酵過程。天然冬蟲夏草分離純化→試管斜面種子→振蕩液壹級種子→二級種子→小型種子發酵罐→生產發酵罐→濃縮→噴粉幹燥→成品菌粉。
冬蟲夏草罐內發酵溫度20-25℃，罐壓392.3-686.5kPa(0.4-0.7kg/cmz)，通氣量0.5-1.ovvm *。註入發酵罐的液體培養基應為罐容量的65%-75%。接種量為65438±00%，攪拌速度為65438±080轉/分，培養時間為72-96小時，然後放入罐中進行濃縮和噴粉。
(3)多用途發酵培養基。鮮馬鈴薯(去皮)8%，蔗糖2%，玉米澱粉0.5%，蠶蛹粉1%，蛋白腖0.4%，硫酸銨0.2%，pH值5.5-6.0。
(4)發酵培養產品的標準。分生孢子幾乎是完全分離的雌孢子梗。當孢子梗數沒有明顯增加時，每毫升分生孢子數為654.38±0.8億~ 25億。殘糖低於1%；當氨基氮低於0.2mg/mL時，即可成為成品菌液。
4.冬蟲夏草接種要點:給寄主昆蟲接種有性或無性冬蟲夏草孢子是人工培育有性冬蟲夏草和無性菌株復壯的關鍵措施。
(1)回接期。冬蟲夏草重接的關鍵是選擇寄主昆蟲的弱抗菌期，壹是蛻皮期；二是幼蟲攝食活動劇烈、摩擦損傷率高的時期。
(2)回接法。有兩種。
A.噴灑方法:在蝠蛾幼蟲4-6齡，65，438+0/3以上幼蟲蛻皮時，集中幼蟲，用5%-65，438+00%葡萄糖溶液噴灑在有子囊孢子或分生孢子的蟲體或食物上。接種後，菌液在昆蟲體上稍幹30分鐘左右，幼蟲放回土壤中自然生活。這種方法感染率高，但缺點是幼蟲不易從土壤中取出集中，集中時幼蟲有自相殘殺的習性。蟲子被咬後，很容易被雜菌感染而死亡。當冬蟲夏草的菌絲沒有充滿體腔時，受傷的蟲體就會腐爛，不能形成剛性的蟲體(菌核)。
B.自然接觸法:在大面積半自然土壤中飼養蝠蛾幼蟲，定期采取小樣本觀察幼蟲的生長狀況。當幼蟲大部分適合被感染時，用飼料植物浸泡液種植並接種細土，均勻地撒在飼養昆蟲的表面，然後噴水使細菌滲入土壤，使幼蟲在取食活動中暴露於感染。這種方法感染率不太高，但壹旦感染，冬蟲夏草生長良好，未感染的蝠蛾幼蟲也能正常生長繁殖。
參考資料:
/keji/shiyongjs/619/te 1 . htm